原生质体 获得原生质体有什么重要作用？

原生质体是什么？

原生质体:去除细胞壁的细胞称为原生质体，是生物工程的概念。动物细胞也可视为原生质体。

原生质体是细胞的形态和结构单位。在细胞学史上，“细胞”这个词是胡克提出来的，意思是“小房间”。原生质体是后来才发现的，对细胞的理解与胡克时期不同。1880年，汉斯坦提出了“原生质体”这个词。由于细胞这个词比原生质体出现得早，所以一直沿用至今。

应用类型——获得原生质体的重要作用是什么？

原生质体被广泛用于DNA转化，因为细胞壁阻止DNA进入细胞。除了DNA和蛋白质转染外，原生质体还用于再生整株植物、通过原生质体融合制备杂种、膜片钳实验等。原生质体可以用来研究生物膜，包括聚合物和病毒的吸收。也用于体细胞突变克隆。原生质体融合技术可用于植物育种。此外，在一些细胞中表达荧光蛋白的植物原生质体可用于荧光激活细胞分选(FACS)，这便于保留在特定波长发出荧光的细胞。

常用方法

去除植物细胞壁的方法可以是机械手工操作或酶水解。早些时候通过机械方法制备原生质体，例如将组织切片置于低渗透性状态以收缩细胞壁(分离原生质壁)。这种方法产量低，现在很少使用。

酶法更可控简单，但需要优化。特定的酶取决于特定的细胞类型:

植物细胞使用纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶的混合物；

对于低等植物细胞，如海藻，酶的使用将取决于细胞壁的组成；

真菌细胞从酵母开始，利用几丁质酶；

细菌细胞用溶菌酶+EDTA。

注意事项-提示

1.确保有足够的初始材料，可以用相同的试剂多次尝试，因为可能需要调整条件。这对酶法制备原生质体尤为重要。

2.为了获得活的原生质体，起始材料应该在生命的全盛时期。因此，我们选择从植物的幼嫩组织开始，或者在生长的对数期积极进行细胞培养。非常年轻的组织通常很小，它们更容易受到伤害，这增加了它们可能无法在治疗中存活的机会。另一方面，旧组织不容易再生，更容易感染。

3.在任何治疗之前，冷却并保存细胞是很重要的。将细胞保持在低温下可以减缓坏死。然而，将细胞温度保持在冰点以上也很重要，因为即使是培养基中短暂形成的冰晶也会损坏细胞并降低产量。

4.原生质对机械压力和渗透压非常敏感。为了防止它们破裂，需要维持等渗条件，也就是说细胞内外的渗透压要相等，渗透压取决于盐离子的浓度。压力不对等会导致细胞破裂(低渗溶液)或内爆(高渗溶液)。

5.即使细胞的年龄和酶的批次略有不同，也会形成细胞壁消化不完全和过度消化的对比。前者产生50%的原生质体，后者导致大量细胞死亡。在大多数实验中，不需要完全去除细胞壁——只需部分去除细胞壁的原生质体即可。