有核红细胞 胎儿有核红细胞在无创产前诊断中应用

随着经济的快速发展，人们的生活压力随着生活水平的提高而增加。此外，雾霾等环境污染的加剧和各种慢性病发病率的增加严重影响了人们的生殖能力，随之而来的不孕不育、胎儿出生缺陷等问题也成为亟待解决的问题。目前，我国每年新增出生缺陷约90万例，不仅严重影响儿童健康，也给整个家庭和社会带来严重的经济负担。随着人工辅助生殖、植入前基因筛查和产前诊断等生物医学技术的发展和普及，这些问题得到了很好的缓解，并给成千上万受这一问题困扰的家庭带来了希望。

无创产前检查，NIPT)

传统的侵入性产前诊断技术，如羊膜穿刺术、绒毛膜活检术、脐带穿刺术、脐带血取样等，对孕妇来说都有流产的风险，并可能引起早产、感染、母体免疫反应等并发症。与羊膜穿刺术等传统诊断方法相比，无创产前诊断具有以下技术优势:误诊率低，流产风险低，可诊断染色体疾病和各种遗传病。在高通量基因组测序的背景下，无创产前检测可以无创地提前预测胎儿的健康状况，并可以判断胎儿是否存在特定疾病的遗传风险，因此在医学领域具有广阔的发展前景。

表1:无创产前诊断方法

目前已知孕妇外周血中有两种胎儿细胞，一种是胎盘细胞，如合胞体滋养层细胞和细胞滋养层细胞；另一种是胎儿血细胞，如淋巴细胞、粒细胞和胎儿有核红细胞。FNRBCs从妊娠早期至分娩时持续存在于母体外周血中，12-14周数量最高，而正常非孕妇外周血中几乎没有FNRBCs。FNRBCs的生命周期较短，约90天，不会受到既往妊娠的影响。FNRBCs属于单核细胞，易于与形态学区分，包含胎儿基因的全部遗传信息。此外，FNRBCs表达几种特异性抗原，如转铁蛋白受体CD71、CD36、血型糖蛋白a 、胎儿血红蛋白等。，可用作识别胎儿细胞的标记。基于上述特点，FNRBCs成为无创产前诊断的理想研究对象。胎儿有核红细胞

一种分离纯化红细胞的方法

孕妇外周血中有核红细胞的含量很少，约为2 ~ 6个细胞/毫升，因此需要进行富集和分离，以进行进一步的基因分析或诊断。目前常用的分离纯化胎儿有核红细胞的方法有流式细胞术、磁珠分选、密度梯度离心、电流分离、显微操作单细胞分离、微流控芯片、亲和素分离等。

流动检测法分离红细胞的实验流程

收集5-10 mL妊娠妇女外周血使用Vacutainer CPT管分离PBMCCD71，CD36，CD235a等FNRBCs表面特异标志物染色Fixation/PermeabilizationSolution进行固定破膜（可选）HbF，PI（或其他核酸染料）等FNRBCs胞内特异标志物染色（可选）流式分析及分选，细胞镜检，分子生物学检测

红细胞在产前诊断中的应用

FNRBCs可用于胎儿性别检测和Rh血型诊断，以及许多胎儿相关疾病的诊断，如非整倍体检测、地中海贫血、杜氏肌营养不良和巨细胞感染。同时可以提前筛查病理性妊娠，如胎儿生长受限、胎儿窘迫、子痫前期等。，为优生优育和孕期健康提供保障。

在早期，最广泛使用的基因检测和分析方法是荧光原位杂交和带有特定染色体DNA探针的聚合酶链反应。目前，基于单细胞测序技术的快速发展，可以在单细胞分离的基础上，通过MDA或MALBAC技术扩增单细胞基因组，然后通过NGS技术对FNRBCs细胞进行遗传分析。未来胎儿出生前可期待全面的基因咨询。

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