倒置显微镜 关于倒置显微镜的哪些事

说说倒置显微镜吧，明白为什么别人的图那么清晰，你的就不行了。

倒置显微镜的结构特点；

倒置显微镜的主要部件与立式显微镜相同。结构上，物镜在样品下方，聚光镜在样品上方。该特征使得在倒置显微镜的聚光器和物镜之间具有更长的工作距离成为可能，使得相对较大的培养容器，包括培养板、培养皿、培养瓶，甚至细胞滚瓶和细胞工厂，可以被放置在台上以观察细胞形态。

倒置显微镜主要用于观察活细胞。活细胞无色透明，不比染色玻片好。如何观察它们？

体内培养的普通细胞虽然没有染色，但细胞内有各种亚细胞结构，质膜和细胞器分布在细胞的不同位置，因此光通过细胞不同位置的光路会有所不同。相位差显微技术将这种不可见的光程差转化为肉眼可见的振幅差(明暗差)。

在相差显微镜的光路中，有两个重要的部件，即物镜后焦面的相位板和聚光器前焦面的环形孔。一般来说，不同的物镜对应不同的相位板，所以在转换物镜时，聚光器上方的环形孔板也需要进行相应的转换:

-相差物镜中间有相位板，所以倒置相差显微镜看不到载玻片？不会，相差物镜也兼容明场观察模式，所以可以倒置观察染色断面，但与前镜相比，由于光程稍长，观察载玻片的效果不如前镜。现在你知道为什么很多研究人员愿意买倒置共焦系统而不是正确的吗？功能很多！

那么如何在现有的倒置显微镜平台上高标准地拍摄载玻片和培养瓶呢？

让我们从标准物镜携带的一个重要符号开始:

除了放大率和数值孔径，以下参数也非常重要:

工作距离:指调整样品焦点时，物镜前透镜与样品表面(或使用盖玻片时盖玻片顶面)的距离。

盖玻片厚度校正:盖玻片是制样中常用的耗材，但它有厚度，会对通过的光线造成一定的改变，从而影响成像的清晰度和亮度。在倒置显微镜上，为了更方便地观察盘子、盘子等不同类型的耗材，往往配置长工作距离物镜。在一些长工作距离的物镜上，我们会发现一圈可以左右旋转的校正环。校准回路的调整可以帮助我们更清晰地观察不同厚度培养基上的细胞样品。

聚光镜上的环形板:对于相差物镜，不同倍数的物镜内置不同的相位板，需要一一对应插入聚光镜的相差滑块上的环形板，才能得到不同倍数下对比度明显的相差图像。

围绕这三个基本点，我们来谈谈如何获得一对高质量的图像:

确保要观察的细胞，无论培养载体是载玻片、室盖玻璃、平板还是滚筒瓶，都在物镜的工作距离内。如果待观察样品远离物镜，超过其工作距离，则不能清晰聚焦；

切换不同放大率的物镜时，应与聚光器上相位差滑块中的环形板相对应，必要时可调节聚光器的孔径光阑，以获得更合适对比度的图像。

如果在一定放大倍数的物镜观察中有细胞爬片、培养皿和带盖片的切片，在观察不同标本时，需要调整物镜上的盖滑校正环，将刻度调整到物镜与样品之间的培养容器的厚度。

为什么拍好照片听起来那么复杂？如果我只是想看细胞状态，保留一张图片进行记录，有没有简单的方法？

对于只用于观察细胞生长状态的基础倒置显微镜，更换物镜和移动相差滑块无疑增加了重复工作量。新奥林巴斯倒置相差显微镜CKX53可以配备IPC预对中系列物镜，在不同倍率切换观察时无需移动相差滑块，所有物镜对应一个环形片。瞬间觉得轻松？！

如果我的实验比较复杂，我想做延迟序列成像，对图像分辨率和荧光灵敏度要求比较高。有好的方案吗？当然有！

作为一家近百年的光学显微镜制造商，奥林巴斯不仅是全内反射荧光显微镜的标杆，而且拥有世界上第一个硅油物镜！

相比最常见的水镜和油镜，硅油物镜不是噱头，人是厉害的人！硅油的折射率约为1.4，水的折射率约为1.33。一般用于油镜的油的折射率约为1.51，而活细胞或组织的折射率为1.38。在目前所有可用的介质中，硅油的折射率最接近样品的折射率。在观察深层组织时，介质的折射率越接近样品的折射率，图像质量越好。

对于组织的深度观察，在使用水镜时，样品与水的折射率差会造成一定程度的球差，从而失去分辨率和荧光强度，使用硅油物镜，由于样品与硅油的折射率非常接近，可以获得更清晰的荧光信号和更高的分辨率。对于延迟序列成像，硅油物镜不仅仅是介质折射率的问题，它的性质是稳定的，在室温下基本保持不变，不像水镜那样有干燥的问题。

奥林巴斯有多种不同用途的硅油物镜，如以下适用于深层组织成像的30倍超消色差硅油物镜:

对于蛋白质共定位研究，还有特殊的物镜:

低色差PLAPON60×OSC物镜，很谦虚的说是低色差。

这种油镜可将405-650纳米处的轴向和横向色差降至最低，支持更精确的同位置分析和测量，并可校正高达850纳米的近红外区域的色差。是近红外荧光观测的最佳选择。

……怎样？品牌不是吹牛，实力不是盖的，连续30年市场占有率第一是有原因的。奥林巴斯除了体积小巧、实力非凡之外，还发布了新型生物显微镜。感兴趣的欢迎咨询！！！