发光细菌 发光细菌法水质急性毒性检测的原理与方法

记者张健

水质发光细菌试验、水质急性毒性试验和发光细菌试验。随着时代的快速发展，水污染问题也在稳步增长。与此同时，许多敏感而有效的环境监测方法被开发出来，这些方法可分为两类:分析技术和生物监测。发光细菌法作为一种新的生物毒性监测技术，可应用于实验室条件下工业废水、生活废水和可溶性化学品的急性毒性监测。

樊菲检测一直处于检测领域的前沿，积极探索和研究发光细菌法，以弥补传统分析技术在检测生物毒性方面的不足。目前，发光细菌法检测废水急性毒性的技术已经非常成熟，可以出具国家认可的权威检测报告。

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一、发光细菌法概述

记者从樊菲试验中了解到，发光细菌的相对发光度与水样中有毒成分的总浓度呈显著负相关。0.05)，所以水样的相对光度可以用生物发光光度计测定，可以用来表示其急性毒性水平。

根据8中描述的条件，水质的急性毒性水平的特征在于等效参考毒性氯化汞浓度(单位为毫克/升)或ECSO值(半有效浓度-样品溶液的百分比浓度)。

二、发光细菌法的原理

樊菲检测工程师还向记者详细介绍了发光细菌法的原理:发光细菌是一种非致病性革兰氏阴性兼性厌氧菌，最适温度为20 ~ 30℃，pH为6 ~ 9，NACL浓度为3%，在正常生理条件下可发出可见荧光。这种可见荧光的波长在450~490 nm之间，在黑暗中肉眼可见。发光细菌法利用灵敏的光电测量系统测量毒物，毒物的毒性可用EC50表示，即发光细菌发光强度降低50%时毒物的浓度。发光细菌含有荧光素、荧光素酶、ATP等发光元素，在有氧条件下通过细胞内生化反应产生微弱荧光。

当细胞活性增加，处于活跃分裂状态时，其ATP含量高，发光强度增强。在毒物的作用下，发光细菌的细胞活性和ATP含量降低，导致发光细菌发光强度降低。实验表明，毒物浓度与细菌发光强度呈线性负相关。因此，可以根据发光细菌的发光强度来判断毒物的毒性，用发光强度来表征毒物所在环境的急性毒性。该方法是20世纪70年代末提出的一种新的微生物监测方法，因其灵敏、快速、简单、成本低而独具特色。

三、发光细菌法测定方法

(1)新鲜发光细菌培养物的测定

将发光细菌接种到液体发光培养基中，在适当的条件下(约20℃)通气培养12小时(对数生长期)。用缓冲液稀释至合适的细菌浓度后，加入试管中，与供试品溶液混合10-20分钟，读出样品管和对照管的光强。

(2)发光细菌和藻类的混合测定

有些毒物对发光细菌没有直接毒性作用，但对藻类有毒性作用。根据这一特点，将培养好的发光菌悬液和藻类悬液混合，加入试管中，与供试品溶液混合。光照一段时间后，测量发光细菌的光强变化。由于对藻类的毒害，藻类的光合作用受到干扰，其释氧能力随机下降。因此，发光细菌的发光强度可以根据光合作用释放的氧气来引起。

(3)发光细菌冻干制剂的测定

对数生长期培养的发光细菌制成干粉，用特殊方法保存在冰箱中。使用时取出加入缓冲液保温平衡5-10分钟，使其恢复到原来的生理状态和发光水平，然后用于检测。具有生理状态一致、对毒物敏感性一致、易于定量测定、结果重复性和可比性好、操作简单、可长期保存等特点，将是该技术的发展方向。

四.报告内容摘要

4.1实验室室温

4.2取样地点、日期和时间

4.3氯化汞浓度或样品稀释百分比浓度与相对光度之间的相关方程

4.5样品的EC50值

4.6测量器和装置

水质发光细菌试验、水质急性毒性试验和发光细菌试验。樊菲检测一直处于检测领域的前沿，积极探索和研究发光细菌法，以弥补传统分析技术在检测生物毒性方面的不足。目前，发光细菌法检测废水急性毒性的技术已经非常成熟，可以出具国家认可的权威检测报告。