质粒图谱 四步教你快速读懂质粒图谱

质粒图谱是质粒DNA序列的物理图谱，提供包括质粒大小、筛选标记、克隆位点、转录和翻译元件等信息。它为我们选择质粒、了解质粒的特性和应用提供了重要的依据。

如何阅读质粒图谱？

各种英文字母的含义是什么？

我们需要了解哪些信息？

今天我教你快速掌握质粒图谱的四个步骤。

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了解质粒图谱的四个要点↓ⅵ

复制起点，它控制着质粒的复制，并决定了质粒的宿主和拷贝数。筛选标记，了解筛选标记类型，方便后续确定筛选重组质粒载体的方法。多克隆位点，既外源基因的插入位点。其他元件，如转录调控元件、翻译表达元件和蛋白标签等。

理解质粒图谱中复制的起源

图中Ori表示质粒复制的起点。质粒的复制起点决定了质粒的宿主与质粒的拷贝数有关。是质粒中的特异序列，富含AT和重复序列。

提示:

图谱上只有一个ori，表示质粒是原核克隆及表达质粒图谱上有两个ori，则表示该质粒是穿梭质粒，既可以在原核也可以在真核中复制

理解质粒图谱中的筛选标记

图谱中的AmpR、KanaR等代表质粒载体中的筛选标记，多为抗生素抗性基因，便于后续抗生素筛选阳性克隆。特点是单词以大写r或上标r结尾。

提示:

只在一种宿主中复制的质粒仅具有一种抗性筛选标记，如原核克隆载体和原核表达载体能够在两种类型宿主中复制和表达的载体会具有两种筛选标记，如穿梭质粒

第三步:了解质粒图谱中的多个克隆位点

图谱中的MCS或排列有许多核酸内切酶的部分是质粒的多重克隆位点。多克隆位点是一系列限制性内切酶消化位点，是外源DNA的插入位点。一般外源DNA可以通过消化/连接的方式插入质粒。

提示:

位于转录启动和转录终止信号之间所包含的限制性内切酶位点数量和组成因载体不同会有所差异其中的酶切位点在质粒中为单一的酶切位点使用时需注意质粒载体与外源DNA酶切位点的兼容性问题

步骤4:查看质粒图谱中还有哪些有用的信息

除了复制起始位点、筛选标记和多重克隆位点，质粒载体还具有一些其他的表达或调控元件，如转录调控元件、翻译调控元件和融合表达标签蛋白。

蛋白纯化标签蛋白：His-Tag，GST-tag等蛋白检测标签蛋白：Myc-Tag，Flag-Tag，HA-Taq等荧光蛋白表达标签：GFP，mCherry等

这里质粒图谱的培养已经基本完成~ ~

来源:微信官方账号“天根”(微信号:天根_生技)

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