在细胞培养过程中,总有一些细胞因为各种原因死亡。活细胞占总细胞的百分比称为细胞活力。细胞活力检测是细胞培养过程中不可缺少的过程。一般需要检查从组织中分离出来的细胞的存活力,以了解分离过程是否对细胞有损伤;复苏后,还应检查细胞的活力,以达到解冻复苏的效果。制备细胞悬液后,细胞用活性染料锥虫蓝染色,并计数。
细胞实验培养过程中,正常细胞的膜是完整的,台盼蓝不能穿透正常完整的活细胞膜,所以活细胞不染色;而失去活性或细胞膜不完整的细胞细胞膜通透性增加,锥虫蓝可以进入细胞使其着色(蓝色)。
在细胞实验过程中,细胞活力检测的操作步骤如下:
1.制备4%锥虫蓝母液:称取4g锥虫蓝,加入少量蒸馏水,研磨,加入双蒸水至100mL,用滤纸过滤,4℃保存。使用时,用PBS稀释至0.4%。
2.胰酶消化贴壁细胞制备单细胞悬液,适当稀释(106细胞/毫升)。
3.将少量细胞悬液与0.4%锥虫蓝溶液以9:1的比例混合,轻吹混匀,染色2~3min。
4.显微镜下观察,死细胞呈淡蓝色,肿胀,无光泽;活细胞保持正常形状,无色透明有光泽。如果有必要计算活细胞率,将染色的细胞悬液滴入细胞计数板进行计数。
活细胞率(%) =活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×细胞总数
注意:台盼蓝染色细胞时,时间不宜过长。否则,一些活细胞会被染色,这会干扰计数的准确性。
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