浮游生物计数框 湖泊浮游生物调查方法

浮游生物调查

1.试剂和仪器

主要试剂见附录1，仪器见附录2和3。

2取样

2.1采样点的布置

2.1.1原则

采样点数根据水域面积、形状、浮游植物生态分布特征和调查目的确定。采样点应具有代表性，能反映整个水体浮游生物的基本情况。

采样点数见表1。采样结果记录在附录4中。

表1设置的采样点数

水体面积(km2)

<2

2~5

5~20

20~50

50~100

100~500

>500

取样点(件)

三

3~5

5~7

7~10

10~15

15~20

20~30

2.1.2湖泊和水库

湖泊应设置在近岸和中心区，可根据湖泊形状分散选择在湖泊中心区、大湖湾中心区、进出水口附近、浅水沿岸区(有水生植物和无水生植物)；水库应设置在水库的中心区域(河道水库应分别位于上游、中游和下游的中心区域)，大型水库湾的中心区域，靠近主要进水口和出水口，位于主要排污口和来水的汇合处。

2.1.3河流

采样断面设置在干流的上游、中游和下游，主要支流汇合处的上游，汇合后与干流充分混合，靠近主要排污口，在河口等河段。根据河道宽度设置横断面采样点，一般小于50m的只在中心区域设置点；两岸水流明显的地方可设50m ~ 100m；采样点应设置在100米以上采样点的左、中、右。

2.2采样水平

2.2.1浮游植物取样

水深小于3m时，只采样中层；水深3m~6m ~ 6 m时，在地表和底部取样，其中地表水距水面0.5m，底水距泥面0.5m。水深6 m ~ 10 m时，表层、中层和底层取样；水深大于10m时，在表层、5m和10m深的水层取样，除特殊需要外，10m以下一般不取样。

浮游动物的取样

根据水体的深度，每隔0.5m、1m或2m取一个水样进行混合，然后取一部分进行浮游动物定量。

2.3采样频率和采样时间

采集次数视研究目的而定，采样次数可逐月或按季节进行，一般按季节进行。样品瓶必须贴上标签，标明收集时间和地点。

采样时间尽量一致，一般在上午8点到10点。

2.4取样方法

2.4.1浮游植物取样

在定性取样之前，应使用水采样器采集定量样品，并从每个取样点采集水的1L值。营养不良水体的产水量应酌情增加。取样前沉淀物应沉淀在容器中。分层取样时，每层水样混合均匀后取水样1L。大型浮游植物的定性样品用25号浮游生物网缓慢拖至水面收集。注意网口垂直于水面，网口上端不应露出水面。

浮游动物的取样

浮游植物的定量样本可用于原生动物、轮虫和无节幼体。例如，单独收集的水样数量应为1L。定性样品采集方法与浮游植物相同。

枝角类和桡足类的定量样品应在定性采样前用水样采样器采集，每个采样点采集10L~50L水样，然后用25号浮游生物网过滤浓缩。滤液应放入标本瓶中，用水洗涤滤液3次，所得滤液也应放入上述瓶中。定性样品用13号浮游生物网在水面缓慢拖曳采集，注意滤网和定性样品采集滤网要分开使用。

3样品的固定

浮游植物样品立即用卢戈氏溶液固定，用量为水样体积的1% ~ 1.5%。如果样品需要长期保存，应加入37% ~ 40%的甲醛溶液，用量为水样体积的4%。

原生动物和轮虫的定性样品，除了留一瓶活体观察外，和浮游植物一样固定。枝角类和桡足类的定量和定性样品应立即用37% ~ 40%甲醛溶液固定，用量为水样体积的5%。

4水样的沉淀和浓缩

摇动固定的浮游植物水样，将其倒入固定在架子上的1L沉淀器中。2h后，轻轻旋转沉淀器，使浮游植物尽可能少的附着在沉淀器壁上，然后静置24h。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸出上清液。虹吸时，管口应始终低于水面，流速和流量不宜过大，沉降和虹吸过程不宜摇晃。如果底部被搅拌，它应该被再沉淀。当吸收至澄清液的1/3时，逐渐减慢流速，直到留下20毫升~ 25毫升(或30毫升~ 40毫升)含沉淀物的水样，并将其放入30毫升(或50毫升)定量样品瓶中。用吸出的少量上清液冲洗沉淀剂2 ~ 3次，一起放入样品瓶中，使体积达到30(或50)mL。如果样品的水体积超过30(或50)毫升，超过恒定体积刻度的多余水体积可以在静置24小时后或计数前吸入。浓缩后的水量取决于浮游植物的浓度。一般情况下，透明度可以作为参考。根据透明度确定的水样浓度体积见表3。浓度标准是每个视野十个以上藻类。

表2根据透明度确定水样的浓度体积

透明度(厘米)

浓缩后的1L水样(毫升)

>100

30~50

50~100

100~50

30~50

500~100

20~30

1000(不浓缩)

<20

> 1000(稀释)

原生动物和轮虫可以和浮游植物算在同一个样本里。枝角类和桡足类通常通过过滤来浓缩水样。

5物种鉴定

优势种要鉴定为种，其他种至少要鉴定为属。除了用于物种鉴定的定性样品外，微型浮游植物应吸收定量样品进行观察，但应在定量观察后进行。

6计数

6.1浮游植物计数

6.1.1计盒线法

在计数之前，需要批准浓缩沉淀后瓶中水样的实际体积。可以加入纯水制成30毫升、50毫升、100毫升等。然后将定量样品彻底摇匀，迅速吸出0.1毫升，放入0.1毫升计数架(面积20毫米×20毫米)。盖上盖玻片后，选择3 ~ 5行，在高倍显微镜下逐行计数，数量少时计数整块。

1L水样中浮游植物的数量(密度)可通过以下公式计算:

………………………………………………(1)

其中:

n——1l水样中浮游生物的数量，每l；

N0——计数箱总数；

N1——计算的方块数；

V1——1l水样的浓缩体积，ml；

V0——计数框的体积，ml；

Pn——浮游植物的计数。

6.1.2目镜视野法

首先用千分尺测量显微镜在一定放大倍数下的视场直径，计算面积。计数视野应均匀分布在计数箱中，每片计数视野的数量可根据浮游植物的数量增加或减少，一般为50 ~ 300个。根据浮游植物数量确定的计算视野数量见表4。

表3根据浮游植物的数量确定计算视野的数量

浮游植物的平均数量(个体/视野)

视野数(片)

1~2

300

2~5

200

5~10

100

>10

50

1L水样中浮游植物的数量(密度)可通过以下公式计算:

………………………………………………(2)

其中:

n——1l水样中浮游生物的数量，每l；

Cs——计算框架面积，mm2

Fs——视野面积，mm2

fn-每个切片计数的视野数；

v——1l水样的浓缩体积，ml；

V0——计数框的体积，ml；

Pn——浮游植物的计数。

6.2浮游动物数量

6.2.1原生动物:吸出0.1毫升样品，放入0.1毫升计数架，用盖玻片覆盖，在10×20倍显微镜下计数整片。每瓶数两个样本，取平均值。

6.2.2轮虫:吸出1mL样品，放入1mL计数架，在10×10倍显微镜下计数整片。每瓶数两个样本，取平均值。

6.2.3枝角类和桡足类:用5mL计数架分几次计数样本。如果样品中的个体太多，用50毫升或100毫升稀释样品，每瓶计数两个样品，取平均值。

6.2.4无节幼体:如果样本中个体不多，则算作枝角类和桡足类；如果量大，将过滤后的样品稀释，充分摇匀，数一数，数3 ~ 5块，得到平均值。也可以和轮虫样本中的轮虫一起计数。

6.2.5计数前，充分摇动样品，快速准确地吸出。盖玻片盖好后，计数盒内无气泡，水样无溢出。

6.2.6每单位体积的浮游动物数量应按下列公式计算

…………………………………………………………(3)

其中:

n——1l水样中浮游动物数量，每只/l；

V——采样体积，l；

Vs——浓缩后样品的体积，ml；

Va——计数样品体积，毫升；

N——计数得到的个体数，1。

6.3注意事项

每瓶数两个样本，取平均值。每个样本的结果与平均值之差不超过15%；否则，必须对第三个样本进行计数，直到三个样本的平均值与相似的两个数字之间的差值不超过平均值的15%。这两个相似值的平均值可以视为计算结果。

浮游植物的计数单位用细胞数表示。对于难以用细胞数表示的群体或细丝，可以计算平均细胞数。浮游动物的计数单位用数字表示。

有的个体一部分在视野内，一部分在视野外。此时只能算上半部分或者只能算下半部分。

在每瓶样品的计数过程中，必须采集优势种的图像，图像应注明为该瓶样品的优势种，并存档备查。

7生物量的测定

浮游植物的比重接近1，可以直接换算成体积的重量(湿重)。必要的长度、高度、直径等。应根据浮游植物的形状和最近的几何形状进行测量。每种至少随机测量50个，计算平均值，代入相应的求积公式计算体积。平均值乘以1L水中这种藻类的数量，得到1L水中这种藻类的生物量，所有藻类生物量之和即为1L水中浮游植物的生物量，单位为毫克/升或克/立方米。

不规则形状可以分为几个部分，根据类似的图形公式计算，然后相加。量大或体积大的，尽量测量体积，计算平均重量。其他类型见表D1。微种只能识别到门口，根据大、中、小三个级别的平均质量来计算。最小值(< 5μ m)为0.0001mg/104；培养基(5微米~ 10微米)为0.002毫克/104；较大的(10微米~ 20微米)为0.005毫克/104。

原生动物和轮虫可以用体积法计算生物体积，比重取L，然后根据体积换算成重量和生物量。甲壳类动物可以通过体长和体重的回归方程，由体长得到体重(湿重)。无节幼体可按湿重0.003mg/片计算。

轮虫、枝角类、桡足类及其幼虫可以直接用电子天平称重。也就是说，首先对样品进行分类，选择30 ~ 50个样品，用滤纸吸收其表面的水分，直到没有水痕，然后在天平上称重。如果个体较小，增加称重次数。

8结果安排

分析浮游植物和浮游动物的种类组成，并按分类系统列出清单，见附件5。数量和生物量的调查结果应随时记录在附录6和7中。

附录1

主要试剂和制剂

1卢戈溶液:称取6克碘化钾，溶于20毫升蒸馏水中。待完全溶解后，加入4g碘，摇匀至碘完全溶解，加入蒸馏水至恒量100mL，保存在棕色试剂瓶中。

2甲醛溶液:37% ~ 40%，5%，(V/V)。

附录2

浮游植物测量仪

1集水器:水深小于10m的水体可以使用玻璃瓶集水器，深水必须使用规格为1000mL的倒置式集水器或有机玻璃集水器。

2浮游生物网:圆锥形，用25号筛丝缝制(孔径0.064mm)。

3水样瓶:1000mL。

4样品瓶:定量样品瓶采用30毫升或50毫升带刻度的玻璃试剂瓶；定性样品瓶采用30 ml ~ 50 ml玻璃或聚乙烯瓶。

沉淀器:1000mL圆柱形玻璃沉淀器或1000mL分液漏斗。

6乳胶管或U型玻璃管:内径2mm。

7.洗耳球。

8级吸管:0.1毫升，1.0毫升

9计数盒:0.1mL(10行× 10行，共100格)。

10个盖玻片。

11显微镜:带测量千分尺。

附录3

浮游动物测量仪

1采样工具:集水器(1000mL、5000mL)、13号浮游生物网(孔径0.112mm)、水样瓶(1000mL、30mL或50mL带刻度)。

2个计数工具:沉淀器(1000mL)、刻度移液管(1.0mL、5.0mL)、计数架(0.1mL、1.0mL、5.0mL)、显微镜、解剖器、盖玻片。

附录4

浮游生物取样台

河流、湖泊和水库的名称:

水体名称

取样位置

样本数量

采样时间

抽样工具

取样水平

样本类别

样品数量

筹划者

天气

风向

底质

水深(米)

透明度(厘米)

流速(米/秒)

温度(℃)

水温(℃)

pH值

生物状况(大型植物、水华等))在采样点

环境

保留票据

记录日期:记录人:

附录5

淡水生物的列表和分布

河流、湖泊、水库名称:生物类别:采样日期:

序列号

种类

学名

采样点分布

总计

记录日期:记录人:

注:分布用以下符号表示:“-”表示较少，“+”表示平均，“++”表示较多，“+++”表示较多。

附录6

浮游植物问卷

河流、湖泊、水库名称:采样日期:

取样位置

浮游植物总量

各门浮游植物数量(生物量)占总量的百分比

数量(10，000支/升)

生物量(毫克/升)

蓝绿藻

绿藻类

黄藻

硅藻

沟鞭毛藻

隐藻门

眼虫

其他的

平均值

测量日期:记录器:

附录7

浮游动物问卷

河流、湖泊、水库名称:采样日期:

取样位置

浮游动物总数

浮游动物总数(生物量)的百分比

数量(10，000支/升)

生物量(毫克/升)

轮虫类

枝角目

桡脚类的动物

原生动物

平均值

测量日期:记录器: