蛋白质检测 手把手教你快速精准定量蛋白质

在蛋白质组学研究中，蛋白质定量具有重要意义。不同的蛋白质样品有不同的干扰成分，因此测定蛋白质浓度的方法也不同。

准确的蛋白质定量有利于蛋白质表达谱的定量比较和蛋白质理化性质的分析。目前常用的蛋白质快速定量方法有四种:直接紫外吸收法、布拉德福法、劳里法和BCA法。

下面主要说说紫外吸收法和BCA法。

一、紫外吸收法:最简单的定量方法

紫外吸收法的优点是:蛋白质含量的测定简单、快速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。

由于蛋白质中存在酪氨酸和色氨酸，所有蛋白质在280nm附近都有一个紫外吸收峰，蛋白质溶液的光密度与其浓度成正比，可以用来定量蛋白质。例如，在柱层析分离纯化中，经常在280nm处进行紫外检测，以判断蛋白质的吸附或洗脱。

虽然方法简单，但也有很大的缺陷。

一方面，由于每种蛋白质的氨基酸组成不同，测定会有一定的误差；另一方面，如果样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，则会造成干扰。

因此，该方法仅适用于测定氨基酸组成与标准蛋白质相似的蛋白质，即定量纯化的蛋白质。

二、BCA法:基于试剂的蛋白质定量方法

BCA蛋白定量试剂盒是基于双喹啉甲酸比色法的总蛋白检测和定量试剂盒。BCA蛋白质定量法的优点是:快速、灵敏、稳定、可靠，对不同种类蛋白质的变异系数很小，因此也受到专业人士的青睐。

BCA法原理:在碱性环境中，蛋白质与Cu2+结合，将Cu2+还原为Cu1+。喹啉羧酸与Cu1+形成紫色络合物，在562 nm处产生光吸收峰，在一定范围内光吸收强度与蛋白质含量近似线性。比色法可以检测和定量蛋白质，可以检测大量样品。

BCA法比Lowy法更兼容洗涤剂，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。

一般来说，紫外吸收法适用于纯化蛋白的定量测定，而基于试剂的BCA蛋白定量法更适用于不完全纯化蛋白和细胞裂解物的浓度测定。

第三，关于BCA蛋白定量方法的一些小技巧

1.干扰BCA定量分析的物质有哪些？

主要是海原型位，螯合剂，强酸或强碱，即使浓度很低也能影响。

2.BCA法和布拉德福德法如何选择？

由样品中的干扰物质决定。BCA洗涤剂有很强的兼容性。如果蛋白质提取试剂不含螯合剂和还原剂，但含有大量洗涤剂，可以使用BCA法；相反，使用的是布拉德福方法。

3.Can 3。BCA检测多肽浓度？

不能，多肽浓度要用专门的多肽浓度检测试剂盒检测。