内毒素 内毒素去除的方法总结及注意事项

内毒素的基本特性:

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中的脂多糖。内毒素只有在细菌死亡，用人工方法溶解或破坏细菌细胞时才释放出来，所以称为内毒素。内毒素位于细胞壁的最外层，覆盖在细胞壁的粘蛋白上。各种细菌内毒素的毒性作用较弱，几乎相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克、弥散性血管内凝血。

所有能引起热原反应的物质都叫热原。药物中的热原主要是细菌内毒素。一般来说，细菌内毒素是热原，但热原不等于细菌内毒素。

细菌内毒素的理化性质；

耐热性:完全失活需要在250℃下干燥烘焙1小时

水溶性:易溶于水，在生产中可用无热原的生水冲洗去热原。

吸附性:可被活性炭吸附

酸碱破坏:用0.1M盐酸或0.1M氢氧化钠浸泡4小时

被氧化剂破坏:浸泡在30%过氧化氢中4小时可完全破坏

固定

去除器皿中的内毒素；

一个

干热法:

适用对象:玻璃制品、金属制品等耐热制品生产中使用的容器

处理方法:180℃3 ~ 4h或250℃30min ~ 2h

注意事项:

1.烘干前，加热的玻璃器皿上最好不要有水滴，否则可能会损坏玻璃器皿。

2.烘烤后，玻璃器皿不应立即从电烤箱中取出，只能在温度适度降低后取出，以免温差过大而损坏玻璃器皿。

3.器具不得包含纸或塑料制品，以避免烘烤过程中燃烧或熔化。

2

化学降解方法:

适用对象:主要用于去除玻璃、塑料等高分子材料中的内毒素。

处理方法:用3 ~ 5%过氧化氢、重铬酸钾硫酸清洗液、0.1M HCl或0.1 M NaOH浸泡。一般治疗4h以上。

注意事项:穿戴防护装备，防止皮肤直接接触。

去除溶液中的内毒素:

方法原理优点缺点液相分离法一些去污剂，如Triton X-114，脱氧胆酸钠能够和内毒素的脂质部分结合，通过液相分离的方法萃取内毒素从而使后者有效地去除。对内毒素的去除率高，且不影响有效成份的活性。该法简单高效、价格低廉、适合大规模应用，在我们日常的蛋白纯化中较为常用。去内毒素后的样品会有微量去污剂的残留。离子交换法当溶液pH合适时，内毒素带有负电荷。因此内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Purose 6 Fast Flow有较强结合。柱上的内毒素用高盐缓冲液或NaOH去除。成本低，吸附容量大适合于溶液中存在其它带负电荷物质的情况亲和纯化法将适当的配基固载于色谱基质上合成出亲和介质，使它特异性结合内毒素。千纯生物的Purose Endotoxin-Removal亲和填料可以特异性吸附内毒素。高效能、高选择性相对成本较高。疏水层析法毒素的脂肪A 部份有很强的疏水性, 但在高盐下会凝集, 无法挂上疏水层析柱。因此可选择能结合目标蛋白的疏水介质去除内毒素适用于高盐浓度的样品相对成本较高分子筛法子筛是利用凝胶的网状结构，根据分子大小进行分离的一种方法。由于蛋白质和内毒素的分子量有较大差别，因此利用分子筛可以有效去除内毒素。去除效果明显每次处理量小，处理时间较长超滤法由于内毒素具有较大的相对分子质量，因此可选用超滤膜去除溶液中的内毒素。操作简单，处理量大操作过程中的压力较高。 不适合含有较大相对分子质量成份的样品。因为在除去热原的同时会阻留或吸附样品中的有效成份，使产品收率大受影响。

注意，去除内毒素的各种方法不是孤立的，可以相互结合使用，如液相分离后的分子筛法或离子交换层析后的疏水层析；设计整个工艺流程时，需要考虑每一步内毒素的去除；不同来源的样品中内毒素的性质存在差异，因此内毒素的去除过程一般不具有普遍性，需要结合工艺流程和特殊性质探索合适的工艺