上皮间质转化 TGF-β通路和上皮-间质转化那点儿套路

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肝癌是世界第三大癌症杀手，最好的治疗方法是手术。但即使早期切除，5年内复发转移比例仍超过50%。因此，从根本上揭示肝癌转移和复发的机制对肝癌的治疗至关重要。

上皮-间质转化是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最重要途径，而转化因子TGF-β是已知诱导肿瘤细胞EMT的关键因子。TGF-β诱导上皮间质转化是研究癌细胞转移的重要手段，也是大多数论文的主要选择之一。

今天，我想和大家分享一篇论文，围绕miRNA的主要研究对象，探讨miRNA如何影响TGF-β诱导的EMT。

主题:MicroRNA-199b-5p减弱TGF-β 1诱导的细胞癌变过程中的表膜-中膜转变

本文以N-钙粘蛋白为初始研究分子，探讨了N-钙粘蛋白的临床意义。检测肿瘤、癌旁组织和HCC细胞株中N-钙粘蛋白的表达，并以密度泛函理论和OS作为判断N-钙粘蛋白表达与预后关系的评价指标。之后，作者通过数据库筛选和实验验证，发现了与N-钙粘蛋白表达相关的miRNA-miR-199b-5p。

同时，临床资料显示，miR-199b-5p具有明显的临床意义，HCC组织标本中miR-199b-5p和N-钙粘蛋白的表达呈明显的负相关。接下来，文章以miR-199b-5p为核心分子，从表型、机制和动物实验三个方面揭示了miR-199b-5p对TGF-β诱导的HCC细胞和癌组织EMT的抑制作用。

以下是对本文主要数据的详细回顾。

1.n-钙粘蛋白在HCC组织中高表达，与预后不良有关

用免疫组织化学方法检测了100例HCC病患者癌及癌旁组织中N-钙粘蛋白的表达。结果如图1A和1B所示，癌组织中N-钙粘蛋白的表达显著增加。

通过蛋白质印迹检测一系列HCC细胞系中氮钙粘蛋白的表达。与正常HCC细胞系HL7702相比，在HCC细胞系中N-钙粘蛋白的表达较高。

对N-钙粘蛋白表达与HCC患者预后关系的进一步研究表明，N-钙粘蛋白高表达的HCC患者的无病生存期DFS和总生存率OS较短。

此外，还研究了N-钙粘蛋白的表达与HCC病患者临床病理特征的关系。N-钙粘蛋白的过度表达与肿瘤分化程度、肿瘤多灶性和血管浸润性显著相关。

2.在HCC细胞中，N-钙粘蛋白是miR-199b-5p的靶点

为了探索微小核糖核酸是否参与调节氮钙粘蛋白的表达，作者通过数据库筛选了八种可能靶向氮钙粘蛋白的微小核糖核酸，即HSA-Mir-26a、HSA-Mir-26b、HSA-Mir-199-5p、HSA-Mir-190、HAS-Mir-204和HSA-Mir-204

将上述8种微小核糖核酸模拟物转染到肝癌细胞中，用蛋白质印迹法检测其表达。结果表明，与其他7种mirna模拟物相比，转染后N-钙粘蛋白的表达下降最多。

miR-199b-5p和N-钙粘蛋白3’-UTR的碱基配对如图2C所示。为了进一步确定miR-199b-5p是否能调节N-钙粘蛋白的表达，分别在HepG2和Huh7细胞中加入miR-199b-5p模拟物和抑制剂，然后检测N-钙粘蛋白的表达。

在miR-199b-5p高表达的HepG2细胞中，N-钙粘蛋白的蛋白和基因表达水平降低，而在miR-199b-5p低表达的Huh7细胞中，N-钙粘蛋白的蛋白和基因表达水平升高。

另一方面，当miR-199b-5p抑制剂添加到HepG2或miR-199b-5p添加到Huh7细胞时，N-钙粘蛋白的蛋白质和mRNA表达水平与上述结果相反。

3.miR-199b-5p在HCC组织和细胞系中低表达

miR-199b-5p在大多数HCC组织中的表达降低。miR-199b-5p和N-钙粘蛋白的表达呈负相关。

对miR-199b-5p表达与HCC患者预后之间关系的进一步研究表明，miR-199b-5p表达低的HCC患者的无病生存期DFS和总生存率OS较短。

在HCC细胞系中，miR-199b-5p的表达降低，并且其表达与N-钙粘蛋白的表达负相关。

4.mir-199b-5p的过表达可促进细胞凝集，抑制细胞侵袭和转移，N-钙粘蛋白的表达可逆转这种效应

在确认miR-199b-5p和N-钙粘蛋白之间的相互作用后，作者开始了表型实验研究，其中选择了三种表型:细胞凝集、细胞侵袭和细胞转移。

在miR-199b-5p过表达的细胞系中，细胞聚集效应增强，细胞的侵袭和转移能力降低。N-钙粘蛋白的表达可以部分逆转上述表型。

5.miR-199b-5p减轻TGF-β1诱导的上皮间质转化

在表型实验中，作者发现miR-199b-5p能抑制细胞的侵袭和转移，EMT是侵袭和转移的重要指标之一。在接下来的实验中，作者将TGF-β1加入到HCC细胞中以诱导上皮间质转化。然后，分别分析了miR-199b-5p和N-钙粘蛋白在TGF-β1诱导的上皮间质转化中的作用。结果表明，miR-199b-5p的过表达可减轻TGF-β1诱导的上皮间质转化。相同的结果已经在体内实验中得到验证。

参考文献:MicroRNA-199b-5p在细胞癌变过程中减弱TGF-β 1诱导的表膜-中膜转变

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