mtt实验 做了 5 年 MTT 实验，跟你分享几点心得体会

经过5年的MTT实验，消耗了数万块96孔板。实验中有成功的喜悦，也有失败的挫折，还有很多话要对同事说。在此之前，我们先回顾一下MTT的原理和操作步骤。

实验原理

MTT是一种接受氢离子的染料，氢离子可以作用于活细胞线粒体内的呼吸链。在琥珀酸脱氢酶和细胞色素c的作用下，形成蓝色甲状晶体。甲状晶体的数量只与活细胞的数量成正比，晶体溶解在DMSO中。通过酶标仪测量490纳米波长下的光密度OD，以反映活细胞的数量。

实验步骤

1.细胞接种:用含有10%胎牛血清的培养液制备单细胞悬液，并将其接种到96孔板中，每孔中含有适当数量的细胞，每孔体积为180微升。

2.培养细胞:培养时间可根据试验目的和要求确定，与一般培养条件相同。

3.显色:向每个孔中加入MTT溶液，每次20微升。继续孵育4小时，停止培养，小心丢弃孔中的上清液。对于悬浮细胞，离心，然后吸取孔中的上清液。向每个孔中加入150微升二甲基亚砜，摇动10分钟，使晶体完全熔化。

4.比色法:选择490 nm波长，测量酶联免疫传感器上各孔的吸光值，记录结果。

个人经历和体会

1.细胞消化和接种量:注意消化和数量，消化和数量，消化和数量。从我个人的实验经验来看，这是最重要的。

如果消化有问题，会影响细胞活性，进而影响OD值。对于一系列易消化的细胞，如MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T等，消化过程中不在胰蛋白酶中加入EDTA，消化过程中胰蛋白酶浸润只需几秒钟。

但对于SW480等一系列不易消化的细胞，应在胰蛋白酶中加入浓度为0.25%的EDTA。接种细胞数量要适当，太小或太大都会影响OD值。

我做过的几种常见细胞的每孔接种数如下:

2.弃去培养液，溶解DMSO:一般大家都喜欢用移液管吸取孔内的培养液。吮吸时，注意吸量管头吸到靠近孔内侧壁的位置，不要碰到底部的紫色晶体。我喜欢把96孔板倒过来放在滤纸上，吸收孔内的培养液。两种方法效果相同，大家根据个人喜好选择。

加入DMSO溶解后，我喜欢把装有DMSO的96孔板放在37℃的培养箱中10 ~ 20 min，有助于DMSO溶解紫色晶体。

以下是我去年12月的一些结果。下图的结果表明，如果不在37℃孵育，紫色晶体的溶解不足，导致OD值较小。

加入DMSO，37℃孵育15分钟，摇匀10分钟。

不孵育，加入二甲基亚砜，振荡10分钟。

以上是我这几年做MTT实验的经验，想和大家分享一下。祝大家实验顺利，早日出版。

图片来源:陈旭

标题图来源:shutterstock.com真品画廊