质粒提取试剂盒 天根DP117-无内毒素质粒大提试剂盒说明书

产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的 溶液P4和过滤器CS1，可有效的出去内毒素、蛋白质杂志；整个提取过程仅需1h，方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200-600μg左右。注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。溶液P1在使用前先加入RNase A 加入2.5ml的平衡液BL，8000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。。取100ml过夜培养的菌液加入离心管，室温8000rpm离心3min收集菌液，尽量吸除上清。注意：菌液较多时候可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌液量以能够充分裂解为佳，菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。尽量吸除上清，为确保上清液全部吸除，请用干净的吸水纸吸去瓶壁上的水滴。向留有菌体沉淀的离心管中加入8ml溶液P1，使用移液器或涡旋振荡器彻底裂解悬浮细菌细胞沉淀。注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低，对于低拷贝质粒，加大菌体用量的同时按比例增加P1、P2、P4的用量。向离心管中加入8ml溶液P2，立即温和地上下翻转6~8次，室温放置5min。注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。向离心管中加入8ml溶液P4，立即温和地上下翻转6~8次，充分混匀，至溶液出现白色分散絮状沉淀。然后室温放置10min左右。8000rpm离心5-10min，使白色沉淀离至管底，将全部溶液小心倒入过滤器CS1中，慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的50ml的管中。注意：加入溶液P4后应立即混匀，避免产生局部沉淀。如果离心后倒入过滤器CS1中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤，如果菌体过多，推荐延长离心时间至20-30min。向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀后转移到吸附柱CP6中。注意：过滤后滤液会损失，根据损失的不同请加入不同体积的异丙醇，吸附柱CP6的最大容积为15ml，所以需要分2次过柱。室温8000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP6重新放回收集管中。注意：将第7步中所得溶液分2次过柱，每次均按以上条件操作。向吸附柱CP6中加入10ml漂洗液PW，8000rpm离心2min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复操作步骤9。向吸附柱CP6中加入3ml无水乙醇，8000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CP6重新放回收集管中，8000rpm离心5min，

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