肥达反应 肥达试验和沉淀反应实验报告

一、实验目的学会肥达反应的原理、方法以及结果分析。理解肥达反应在伤寒和副伤寒杆菌感染检测中的应用。二、实验器材生理盐水、患者血清、伤寒杆菌H菌液、伤寒杆菌O菌液、甲型副伤寒杆菌H液、乙型副伤寒杆菌H菌液水浴锅、冰箱、小试管32支、试管架、记号笔、移液枪三、实验原理1.伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原、鞭毛抗原、体表抗原。其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达试验的检测项目。当抗原遇到特异性抗体时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。2.用已知的伤寒沙门菌菌体抗原和鞭毛抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。四、实验过程及步骤1. 取清洁小试管32支，分成4排，每排8支，依次编号。2.32支小试管，用移液枪各注入0.5ml生理盐水。3.第一管内加入1：10稀释的患者血清0.5ml，用1ml吸管吹吸三次，混匀，吸出0.5ml注入第二管作对倍稀释，……依次稀释至第7管，弃去0.5ml，第8管为对照。第二排、第三排、第四排以相同步骤加入患者血清。4. 第一排各管内注入伤寒杆菌H菌液0.5ml；第二排各管注入伤寒杆菌O菌液0.5ml；第三排各加入甲型副作寒杆菌H液0.5ml；第四排各管加入乙型副伤寒杆菌H菌液0.5ml。5. 置于56℃水浴箱2~4小时。6.放冰箱过夜或放37℃水浴箱18小时后观察结果。7. 结果观察最强:上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。强：上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。弱：上液混浊，细菌少部分凝集。不凝：液体呈乳状与对照管相同。五、实验总结1.结果与分析：先观察对照管，正确结果应无凝集现象，再观察各试验管的凝集现象，凝集程度以“+”多少表示之。最强，上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。强，上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。弱，上液混浊，细菌少部分凝集。不凝，液体呈乳状与对照管相同。效价判定：以能出现“++”凝集现象的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。一般认为O抗体效价在1：80以上，H抗体效价在1：160以上，有辅助诊断意义。H甲或H乙达到1：80或以上具有诊断意义。但在分析结果时，应注意以下两点：非肠热症患者，由于曾接种过伤寒，副伤寒疫苗或以往在流行区有过隐性感染或患过伤寒，副伤寒，以及回忆反应等原因，也可呈现阳性结果。不过，由这些原因所引起的阳性反应主要是H抗体升高，O抗体效价一般不高，同时，每隔5~7天试血一次，其抗体效价一般不会随病程而升高。上述这些都有别于现症感染。少数肠热症患者，由于发病初期曾使用大量抗生素，或机体有免疫缺陷病，或机体反应性极弱等原因，抗体效价可以很低，甚至为阴性结果。因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论，必须结合当地流行情况，既往接触史，以及临床症状和体征，做出正确的判断。2.肥达反应的诊断标准：肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断，其结果的解释必须结合临床变现和病程，病史，以及地区流行病学情况。机体患伤寒、副伤寒，一般于发病后1~2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升，此时即可为阳性，第4周可达峰值，以后又逐渐降低。一般以“O”凝集效价在1/80或以上和 H”在1/160或以上为阳性。O抗体主要是IgM,出现较早；H抗体主要是IgG,出现较晚。根据此特点，肥达试验结果有如下诊断价值：二者均超过正常值，患伤寒的可能性大；二者均在正常值内，患伤寒的可能性小；H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染；一般间隔1~2周复查，若抗体效价比前次结果增高2~4倍，则具有诊断价值。六、教师评价一、实验目的掌握对流免疫电泳的原理和方法，了解其用途。二、实验器材电子天平、锥形瓶、200ml量筒、药匙、称量纸、水浴锅、微波炉、洗耳球、玻片、移液管、废液缸、打孔器、胶头滴管、移液枪、镊子、纱布条、电泳槽pH8.6 0.05mol/L巴比妥缓

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