IVD知识文库系列-11.14微生物检测の泌尿生殖道病毒

编者按：

本次章节新增篇章，为泌尿-生殖道病毒篇章。包含了：泌尿-生殖道病毒相关的知识点。

关键词：泌尿-生殖道病毒。

其意义在于概括了解泌尿-生殖道病毒及市场。

一

泌尿生殖道感染及病毒性皮肤病

泌尿-生殖道感染

泌尿生殖系统感染是致病微生物侵入泌尿生殖系统而引起的炎症反应，一般指普通致病菌引起的非特异感染，是泌尿外科最常见疾病之一。

泌尿系统感染通常称尿路感染，根据感染的部位分为:

上尿路感染:累及肾、肾盂及输尿管。

下尿路感染:累及膀胱和尿道。

非特异性致病菌占70%左右，以G—杆菌为主，最常见的为大肠埃希菌，约占50％。其他为肠杆菌属、变形菌、克雷白菌、沙门菌、铜绿假单胞菌等。

G+菌引起的感染约15%，包括葡萄球菌（金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌）、链球菌、粪链球菌等。其他。

特异性致病菌主要为结核杆菌和淋球菌等。

性传播性疾病

指通过性行为或类似性行为传染的一组传染病。

我国需传报的有8种性病：淋病、艾滋病、梅毒 –非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、性病性肉芽肿、生殖器疱疹。

病毒性皮肤病

病毒可引起全身性传染性疾病，只有一小部分以皮肤、黏膜病变为主。

临床上根据其核酸的组成分为：

DNA病毒

RNA病毒

病毒性皮肤病主要由 DNA病毒引起。

病毒感染可通过三种方式侵犯皮肤：

① 直接感染：如疣病毒、传染性软疣病毒、原发性单纯疱疹是通过直接感染，在表皮内以复制的方式而发病。

② 系统感染：指在病毒血症期间感染皮肤，如水痘、麻疹、风疹等。

③ 从体内局部扩散：复发性单纯疱疹、带状疱疹是由外周神经潜伏的病毒因活跃而扩散至局部皮肤而发病。

病毒性皮肤病临床表现分为三型：

① 疱疹型 如单纯疱疹、水痘、带状疱疹等；

② 红斑发疹型 如麻疹、风疹等；

③ 新生物型 如各种疣等；

近来对病毒性皮肤病，皆以所致皮肤病的病毒种类来进行分类。现归纳如下：

(一)DNA病毒

1．疱疹病毒组

(1) 单纯疱疹病毒 单纯疱疹、Kaposi水痘样疹。

(2) 水痘-带状疱疹病毒 水痘、带状疱疹。

(3) 巨细胞病毒 巨细胞包涵体病。

(4) 人类疱疹病毒4型(EB病毒) 传染性单核细胞增多症、慢性EB病毒引起的环状肉芽肿样皮疹。

(5) 人类疱疹病毒6型 幼儿急疹。

(6) 猿疱疹病毒(B病毒) B病毒病。

2．痘病毒组

(1) 天花病毒 天花、种痘反应、牛型痘、牛痘样湿疹。

(2) 副牛痘病毒 挤奶人结节、羊痘。

(3) 传染性软疣病毒 传染性软疣。

(4) 猴天花病毒 猴天花病毒病、yaba猴病毒病。

3．乳头多瘤空泡病毒

寻常疣、

扁平疣、

跖疣、

尖锐湿疣、

疣状表皮发育不良、

鲍温样丘疹病、

口腔灶性上皮增生。

4．肝炎病毒所致的皮肤病

小儿丘疹性肢端皮炎、

乙型肝炎抗原血症、

A型肝炎、丙型肝炎病毒感染皮肤表现。

(二)RNA病毒

1．副粘病毒

(1) 麻疹病毒 麻疹、非典型麻疹综合征。

(2) 风疹病毒 风疹、风疹综合征。

(3) 呼吸道融合病毒 呼吸道融合病毒感染症。

2．小RNA病毒

(1) 柯萨奇(Coxsackie)病毒 疱疹性咽峡炎，手、足、口病，口蹄疫，柯萨奇湿疹，柯萨奇病毒疹。

(2) 埃可(ECHO)病毒 埃可病毒疹。

3．虫媒病毒 登革热、西尼罗河热、白蛉热、绿猴病、病毒性出血热。

4. 腺病毒 腺病毒疹。

5．细小病毒 传染性红斑。

(三)可能由病毒引起的皮肤病

急性发热性皮肤粘膜淋巴结综合征(川崎病 )、Duke病。

二

常见的泌尿生殖道疾病及检测

一、生殖器疱疹

1）由单纯疱疹病毒感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤粘膜引起，即HSV-1 和HSV-2。

HSV是双链DNA病毒，属于人类疱疹病毒α亚科，人类是HSV的唯一自然宿主 v病毒颗粒直径约150nm，其中央为病毒核心，含有病毒基因组DNA 。

病毒具有嗜感觉神经节而形成潜伏感染状态的特性。

潜伏部位：骶神经根区。

临床表现多样

典型：集簇性水疱、脓疱、溃疡及结痂。

不典型：非特异性红斑、丘疹、裂隙、硬结、毛囊炎、皮肤擦破、红肿渗液性包皮龟头炎。

并发症

中枢神经系统并发症：无菌性脑膜炎、自主神经功能障碍、横断性脊髓炎和骶神经根病。

疱疹性脑膜脑炎：发热、头痛、呕吐、畏光和颈项强直。

播散性HSV感染：皮肤感染、脑膜炎、肝炎、肺炎、关节炎等。

实验室检查

1.培养法：细胞培养HSV阳性。是HSV检测的金标准，敏感、特异。验室要求较高，需要的时间长。适合参比室开展。

2.细胞学检查：查见多核巨细胞和核内包涵体敏感性和特异性差。

3.抗原检测：直接免疫荧光试验、流式荧光法、免疫酶染色和酶联免疫吸附试验敏感性是病毒分离培养法的70%-90%方法简单，是现在临床HSV常用的的检测方法。

4.HSV-DNA或基因检测法：PCR的敏感性和特异性高操作复杂，实验要求较高，要防止污染而出现假阳性。

中华人民共和国卫生行业标准

即生殖器疱疹诊断标准

二.人类乳头瘤病毒感染

由人类乳头瘤病毒（Human papilloma virus ,HPV）感染引起的皮肤或粘膜上皮增生物。 迄今，已有80余种HPV类型被确定

HPV类型与临床表现具有相关性，可形成潜伏感染、亚临床感染、各种疣、良性肿瘤或恶性肿瘤。

实验室检查

1.培养法：细胞培养HPV阳性。是HPV检测的金标准，敏感、特异。验室要求较高，需要的时间长。适合参比室开展。

2.细胞学检查：角化不全、空泡细胞 、透明角质颗粒浓染增多。

3.抗原检测：直接免疫荧光试验、流式荧光法、免疫酶染色和酶联免疫吸附试验。

4.HPV-DNA或基因检测法：PCR的敏感性和特异性高操作复杂，实验要求较高，要防止污染而出现假阳性，是现在临床HPV常用的的检测方法。

三.带状疱疹

带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒（VZV）所引起的，以沿单侧周围神经分布的簇集性小水疱为特征的，常伴有神经痛的急性疱疹性皮肤病。

本病常突然发生，表现为成群的密集性小水疱，沿一侧周围神经作带状分布，常伴有神经痛和局部淋巴结肿痛，愈后极少复发。

本症多好发于春秋季节。多见于成人，儿童较少见。与水痘的流行规律不同，本病常呈散发性。

实验室检查

半数患者白细胞总数在5×109／L以下，白细胞偏低的患者在好转期或痊愈后可以恢复正常。胸段带状疱疹宜作x线透视或摄片，因1／3以上病例可发现结核等肺部病变。脑脊液检查少数患者可有蛋白增高及白细胞增多。

1.培养法：细胞培养HZV阳性。是HZV检测的金标准，敏感、特异。验室要求较高，需要的时间长。适合参比室开展。

2.细胞学检查：本病根据典型临床表现即可作出诊断，疱底刮取物涂片找到多核巨细胞和核内包涵体有助于诊断。

3.抗原检测：直接免疫荧光试验、流式荧光法、免疫酶染色和酶联免疫吸附试验。

4.HZV-DNA或基因检测法：PCR的敏感性和特异性高操作复杂，实验要求较高，要防止污染而出现假阳性，是现在临床HZV常用的的检测方法。

三

泌尿生殖道标本的细菌学检查

常见标本的处理

女性：

尿道分泌物拭子：NG

阴道分泌物拭子：NG

白带:念珠菌，阴道加德纳菌

动弯曲菌，毛滴虫

宫颈分泌物拭子(内膜除外)：NG

男性：

尿道分泌物拭子（诊断未明）：肠道细菌，NG

对于生殖器支原体来说，溶脲脲原体和人型支原体可以从泌尿生殖道分离到。

对于男性，常送检尿道试子。

女性则用阴道，宫颈或尿道拭子送检，尽管柔膜体纲并不经常与阴道炎相关。

尿液需要送检和分析，但其微生物的产量比试子的低。

四

常见消化道病毒检测方法

（一）病毒分离培养

利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的金标准。

病人尿液或生殖道分泌物标本是最常采集的标本。

TAT时间≥1周

（二）病原学相关检查

血清学鉴定：

利用酶联免疫吸附试验( ELISA) 捕捉法或间接法检测早期病人血清中的IgM 和I gG 抗体, 是较常用的检测指标。

此方法在检测中不适用于早期诊断, 可作为回顾性诊断。

PCR 技术：

PCR 可检出几乎所有各类型泌尿生殖道病毒血清型。

EV- PCR 一般可在收到标本后5~ 24h 内提供诊断结果, 是目前较理想的诊断技术。

PCR 从脑脊液、血、尿、粪、咽拭标本中检出肠道病毒, 其灵敏度达88% ~ 100%, 特异性为83% ~97%。

荧光实时定量PCR 应用与靶序列直接结合的荧光探针可将生成的RNA 加以定量, 其特点为检测快速( 从样品准备到数据分析只有3 h) 、敏感性强、扩增产物可直接定量、密闭系统防止交叉污染等, 这些优点奠定了其在肠道病毒检测中的应用空间。

使用TaqMan PCR 具有自动化、易标准化的特点, 使其可能成为病毒检测中组织培养的替代方法。

五

病毒检测方法学对比及注意事项

机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。

若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。

因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势检测抗体IgM比IgG更有临床意义。