影片主要讲述了亚历克斯、马蒂、格洛丽亚和梅尔曼还在非洲悠闲生活的时候，四只企鹅已经回到了纽约的中央动物园，他们在那里负责管理。与此同时，它们还要执行各种秘密任务，时不时会逃出动物园。
马达加斯加的另一对角色，古怪的国王朱利安和狐猴莫里斯也有新的表演。最明显的是，朱利安国王总是和疯狂的企鹅发生冲突。四只企鹅滑稽古怪的样子给大家留下了深刻的印象。他们机智勇敢，追求团队精神，相互合作，帮助其他动物，工作效率高。与此同时，狐猴身上也发生了一系列疯狂有趣的故事。
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