百奥赛图 百奥赛图科普知识系列——Reporter mice

嗨，下午好，读者朋友们！每当你怀着敬佩的心情阅读CNS文献，看到那些高端高气的图，你会不会觉得科研的灵魂在燃烧？各种记者鼠是这些美图不可缺少的一部分。今天，边肖为您带来关于记者鼠的科普知识。

所谓的记者鼠，就是把记者基因敲进去的老鼠。td番茄鼠、mT/mG鼠、LacZ鼠、彩虹鼠等。很常见。它们的重要作用是验证各种Cre工具小鼠的特异性表达。简而言之，它们是“工具鼠的工具鼠”:我们在前面介绍的Cre-loxp系统中已经知道了具有特异表达的Cre工具鼠，但是如何验证这种鼠的特异表达呢？以前，报告小鼠被巧妙地设计来指示Cre小鼠的特异性。

B-tdTomatocKI大鼠

td番茄大鼠tm1/bcgen)在ROSA位点敲入CAG启动子、td番茄蛋白编码序列和WPRE序列，并在CAG启动子和td番茄序列之间插入LSL序列。如图1所示。

图1。td番茄的目标策略

正常情况下，由于3×stop的存在，这种小鼠不能表达红色荧光。与Cre小鼠或TAM激活的CreERT2小鼠交配后，Cre重组酶产生的后代切掉3×stop，表达tdtophin，在Cre或CreERT2表达的组织中能发出红色荧光，表明基因的位置。图2显示了TDTomotive CKi大鼠的实验结果:

图2。td番茄大鼠与脑特异性表达Cre大鼠交配后后代的组织荧光实验

图中红色的部分是老鼠的大脑，醒目的红色部分是老鼠的海马体。朋友觉得很酷吗？

MT/mG小鼠

mt/mg小鼠在设计上更为精致。这种小鼠组织在被Cre重组前可以在膜上发出红色荧光，被Cre重组后在膜上发出绿色荧光。因此，顾名思义，mT/mG的m表示膜，t表示TDToP，g表示eGFP。为了达到这个效果，在ROSA位点敲除了pCA启动子、一段mT和pA序列、一段mG和pA序列，并在mT和pA序列的两端插入一段loxp位点，如图3所示。

图3。MT/MG小鼠的靶向策略

在正常情况下，这种小鼠表达位于膜上的TD番茄荧光蛋白，mT序列后面的pA信号会强行终止后面序列的转录过程。在Cre重组后，Mt+PaA序列被切除，并表达了下面的mG蛋白。所以你会在成千上万的红色灌木丛中得到一点绿色的效果，如图4所示。这个神奇的特性赋予了它一个特殊的功能:工具鼠标的工具鼠标，即验证各种特定表达工具鼠标的表达位置。

图4。cre重组后的小鼠组织

R26R小鼠

R26R小鼠是由pROSA26-1载体构建的报告小鼠，插入了LSL序列和LacZ序列，如图5A所示。这种小鼠在正常情况下不表达LacZ，用LacZ底物X-Gal染色组织切片不能显色；然而，在通过Cre重组后，因为LSL序列被敲除并且LacZ被表达，当小鼠组织切片用X-Gal染色时，出现蓝色反应，如图5B所示。当然，因为LacZ小鼠只能通过X-Gal显色，所以只适合体外检测。

图5。LacZ小鼠靶向方案和体外检测及显色

R26R-Brainbow2.1小鼠

Brainbow鼠标gt26 sort m1cle)，顾名思义，是一种彩虹般的鼠标。相比之前的记者鼠标，这款鼠标的设计更上一层楼。

Brainbow小鼠使用三种不同的lox位点:lox2272、loxN和loxp。当不同的Cre小鼠切割不同的序列时，可以发出不同的荧光。拍摄模式如图6所示。

图6。B彩虹鼠的瞄准策略

你看起来有点头晕吗？其实原因还是很简单的。每个序列中有一个短的pA信号序列，发光基团作为转录强制终止。只有相应的Cre需要识别相应的lox位点才能正确发光。所以，幸福就是在对的时间遇到对的人。图7是一只Brainbow小鼠的快乐:上述四种荧光基团发出10种不同的颜色，表示不同基因启动子的表达位置。

图7。braibow小鼠重组组织的显色

好了，今天的科普分享到此结束。请多关注100年奥运会。我们将为您带来更多的科普知识、文献解读和优质的模型动物。祝你科研顺利。

参考文献:

1 . http://www . bbctg . com . cn/index/article/index/aid/504 . html

2.引用该论文王志平，王志平，王志平，王志平，王志平.创世纪，2007，45: 593-605。

3.引用该论文王志平，王志平，王志平.自然遗传学，1999，21: 70。

4.柳井俊，田中T，上野H .多色荧光示踪法与肠道肿瘤.胃肠病学杂志，2013，48: 423-433。

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