dtt配制 实验室34种贮存液的配制方法

实验室34种贮存液的配制

1.30%丙烯酰胺溶液

“制备方法”:将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲基双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解，加水至最终体积为100ml，用0.45μm的孔滤器过滤灭菌，验证溶液的pH值应不大于7.0，室温下保存于棕色瓶中。

→丙烯酰胺具有很强的神经毒性，可以通过皮肤吸收，作用是累积的。称丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺时应戴手套和口罩。聚丙烯酰胺可以被认为是无毒的，但应该小心，因为它可能还含有少量未聚合的物质。一些低价的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子。在丙烯酰胺储存溶液中加入约0.2倍体积的单床混合树脂，搅拌过夜，然后过滤净化。在储存过程中，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会慢慢转化为丙烯酰基和二丙烯酸酯。

2.40%丙烯酰胺

“配制方法”:将380克丙烯酰胺和20克N，N’-亚甲基双丙烯酰胺溶于总体积为600毫升的蒸馏水中，继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后用蒸馏水补足最终体积。

→制备30%丙烯酰胺参见以上说明，DNA序列测定采用40%丙烯酰胺溶液。

3.放线菌素D溶液

“制备方法”将20毫克放线菌素D溶于4毫升100%乙醇中，以1: 10稀释储存溶液，用100%乙醇作为空白色对照读取OD440nm值。纯放线菌素D在水溶液中的摩尔消解系数为21900，所以1毫克/毫升放线菌素D溶液在440

→放线菌素D是致畸剂和致癌物。配制该溶液时，必须戴手套并在通风柜中操作，但不要在实验台上操作。小心吸入粉末或使其接触眼睛或皮肤。

此外，制药公司提供的治疗用放线菌素d产品通常含有糖或盐等添加剂。只要放线菌素d的浓度是通过测量储存溶液在440纳米波长下的光吸收来确定的，这样的产品就可以用来抑制自我导向。

4.0.1摩尔/升三磷酸腺苷溶液

“制备方法”:将60毫克三磷酸腺苷溶于0.8毫升水中，用0.1毫升/升氢氧化钠调节酸碱度至7.0，用蒸馏水定容至1毫升，在-70℃下分小份储存。

5.10摩尔/升乙酰乙酸酯溶液

“制备方法”将770克醋酸酰基溶于800毫升水中，加水至1L定容，然后过滤、灭菌。

6.10%过硫酸铵溶液

“制备方法”将1g过硫酸铵溶于最终量的10ml水溶液中，可在4℃下保存数周。

7.BCIP解决方案

制备方法:将0.5g 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐溶于10ml 100%二甲基甲酰胺中，4℃保存。

8.2×BES缓冲盐溶液

“制备方法”将1.07克盐溶液BES、1.6克氯化钠和0.027克Na2HPO4溶于总体积为90毫升的蒸馏水中，室温下用盐酸调节溶液的酸碱度至6.96，然后加入蒸馏水至恒量100毫升，用0.22μm过滤器过滤灭菌，分装

9.1摩尔/升氯化钙溶液

“制备方法”溶解54g氯化钙& # 8226；6H2O，用0.22μm过滤器过滤灭菌，分成10毫升小份，在-20℃保存。

→制备感受态细胞时，取出一小部分，解冻，用蒸馏水稀释至100毫升，用纳金过滤器过滤，然后骤冷至0℃。

10 . 2 . 5毫升/升氯化钙溶液

“制备方法”将13.5克氯化钙溶于20毫升蒸馏水中。6H2O，用0.22μm过滤器过滤和灭菌，分成1毫升小份，在-20℃保存。

11.1摩尔/升二硫苏糖醇溶液

“制备方法”用20毫升0.01摩尔/升乙酸钠溶液溶解3.09克差热分析，过滤，灭菌，分成1毫升份，在-20℃保存。

→ DTT或含有DTT的溶液不能在高压下处理。

12.脱氧核苷三磷酸溶液

“制备方法”将各dNTP溶于水中至浓度约100mol/L，用微量移液管吸取0.05mol/l Tris碱，调节各dNTP溶液的pH值至7.0，取一份各中和后的dNTP溶液进行适当稀释，读取给定波长下的光密度，计算出各dNTP的实际浓度，然后用水稀释至最终浓度50 mmol/L

13 . 0 . 5摩尔/升乙二胺四乙酸溶液

“制备方法”添加186.1克乙二胺四乙酸二钠二水合物，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用氢氧化钠调节溶液的酸碱度至8.0，然后定容至1L，包装，高压灭菌备用。

→EDTA二钠盐需要NaOH调节溶液pH值接近8.0才能完全溶解。

14.溴化乙锭

“制备方法”将1克溴化乙锭加入100毫升水中，磁力搅拌数小时，确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移到棕色瓶中，室温保存。

→溴化乙锭为强诱变剂，毒性中等。使用含有这种染料的溶液时，一定要戴手套，称量染料时要戴口罩。

15.2×HEPES缓冲盐溶液

“制备方法”将1.6g氯化钠、0.074g KCl和0.027g Na2PO4溶解。用0.5毫升/升氢氧化钠将2H2O、0.2克右旋糖酐和1gHEPES调节至7.05，然后用蒸馏水定容至100毫升，然后用0.22μm过滤器过滤和灭菌，然后分成5毫升小份，在-20℃保存。

16.IPTG解决方案

“制备方法”IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷。将2g IPTG溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm过滤器过滤灭菌，然后分成1ml份，于-20℃保存。

17.1摩尔/升醋酸镁溶液

“制备方法”:将214.46克醋酸镁四水合物溶于800毫升水中，过滤，用水灭菌至恒量1 L .

18.1摩尔/升氯化镁溶液

“制备方法”溶解203.4克氯化镁&:# 8226；6H2O，与水一起定容至1L，分装成小份，高压灭菌备用。

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19.β-巯基乙醇溶液

“配制法”一般获得14.4mol/L的溶液，应在4℃下保存在棕色瓶中。

→ BME或含有BME的溶液不能在高压下处理。

20.NBT解决方案

“制备方法”将0.5g蓝色四唑氯化物溶于10ml 70%二甲基甲酰胺中，4℃保存。

21.苯酚/氯仿溶液

“制备方法”:将苯酚和氯仿等体积混合，然后与0.1mol/L Tris混合？将HCl提取数次以平衡混合物，将其置于棕色玻璃瓶中，盖上等体积的0.01mol/l Tris？氯化氢液体层，储存在4℃。

→苯酚具有高度腐蚀性，可导致严重烧伤。操作时要戴手套，戴护目镜，穿防护服。所有操作都应在化学通风橱中进行。接触苯酚的皮肤要用大量的水、肥皂和水清洗，不要使用乙醇。

22.10毫摩尔/升苄基磺酰氟溶液。

“制备方法”:将PMSF溶解在异丙醇中至1.74毫克/毫升，将其分成小份并储存在-20℃。如有必要，可制备浓度高达17.4毫克/毫升的储存溶液。

→\\\\\一旦眼睛或皮肤接触到PMSF，应立即用大量清水冲洗。被PMSF污染的衣服应该丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。使用前应将其从储存溶液中加入裂解缓冲液中。水溶液中PMSF活性的损失率随着酸碱度的增加而增加，25℃时的失活率高于4℃。当酸碱度为8.0时，20微克/升PMSF水溶液的半衰期约为85分钟。8.6)在室温下放置几个小时后，可以安全丢弃。

23.磷酸盐缓冲溶液

“制备方法”:将8克氯化钠、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4和0.24克KH2PO4溶于800毫升蒸馏水中，用盐酸调节溶液的酸碱度至7.4，加水至1L恒量，以15磅/平方英寸蒸汽灭菌20分钟，室温保存。

24.1摩尔/升乙酸钾溶液

“制备方法”:将9.82克醋酸钾溶于90毫升纯水中，用2毫升/升醋酸调节酸碱度至7.5，加入纯水至恒量1L，于-20℃保存。

25.乙酸钾溶液

“制备方法”:将11.5毫升冰醋酸和28.5毫升水加入到60毫升5毫升/升醋酸钾溶液中，即钾浓度为3毫升/升，醋酸浓度为5毫升/升的溶液.

26.3摩尔/升乙酸钠溶液

“制备方法”将408.1克三水醋酸钠溶于80毫升水中，用冰醋酸调pH值至5.2或用稀醋酸调pH值至7.0，加水至恒量1L，然后高压灭菌。

27.5毫升/升氯化钠溶液

“制备方法”:将292.2克氯化钠溶于800毫升水中，加水至1L恒量，然后高压灭菌。

28.10%十二烷基硫酸钠溶液

“制备方法”将100克电泳级SDS溶于900毫升水中，加热至68℃帮助溶解，加入几滴浓盐酸调节溶液的酸碱度至7.2，加水至恒量1L，包装备用。

→SDS的细纹容易扩散，称重时要戴口罩。称重后，应取出称重工作区和天平中剩余的SDS。10%SDS溶液不需要灭菌。

29.20×SSC溶液

“制备方法”将175.3克氯化钠和88.2克柠檬酸钠溶于800毫升水中，加入几滴10毫升/升的氢氧化钠溶液调节酸碱度至7.0，加水至恒量1L，然后高压灭菌。

30.20×SSPE溶液

“制备方法”将17.5克氯化钠和27.6克磷酸氢二钠溶于800毫升水中。H2O和7.4g乙二胺四乙酸，用氢氧化钠溶液调节酸碱度至7.4，加水至1L定容，分装后高压灭菌。

31.100%三氯乙酸溶液

“制备方法”向装有500克TCA的瓶中加入227毫升水，所得溶液含有100%TCA。

32.1摩尔/升Tris溶液

“制备方法”:将121.91克Tris碱溶于800毫升水中，加入浓盐酸，调节酸碱度至所需值。在最终调节酸碱度之前，溶液应冷却至室温，加水至1L恒量，然后在高压下灭菌。

→如果1mol/L溶液呈黄色，应丢弃，用质量较好的Tris配制。Tris溶液的Tris pH值随温度变化，温度每升高1℃，pH值降低约0.03个单位。例如，0.05摩尔/升溶液在5℃、25℃和37℃时的酸碱度分别为9.5、8.9和8.6。

Tris缓冲盐水

“制备方法”:将8克氯化钠、0.2克KCl和3克Tris碱溶于800毫升蒸馏水中，加入0.015克苯酚，用盐酸调节ph值至7.4，用蒸馏水调节至1L体积，分装，以151磅/平方英寸蒸汽灭菌20分钟，室温保存。

34.x-gal溶液

“制备方法”将X-gal溶解在二甲基甲酰胺中，制备20毫克/毫升的储存溶液。储存溶液储存在玻璃管或聚丙烯管中。含有X-gal溶液的试管必须用铝箔包裹，以防被光损坏，并在-20℃下保存。X-gal溶液不需要过滤和灭菌。