表型 手把手教你浆细胞疾病表型分析和解读，简单明了直截了当

浆细胞疾病有很多种:

浆细胞骨髓瘤（Plasma cell myeloma，PCM，又常叫多发性骨髓瘤MM）冒烟型骨髓瘤（Smouldering myeloma）非分泌型骨髓瘤（Non-secretory myeloma）浆细胞白血病意义未明单克隆丙种球蛋白病（Monoclonal gammopathy of undetermined significance，MGUS）浆细胞瘤（Plasmacytomas）淀粉样变（Amyloidosis）POEMS综合征（即多发性神经病变，器官肿大，内分泌失调，单克隆丙种球蛋白病和皮肤改变五种症状缩写）

虽然物种这么多，但归根结底都是异常浆细胞克隆造成的。流动在分析浆细胞克隆特性中起着非常重要的作用。因此，通过分析浆细胞的性质，你可以帮助临床医生解决一个大问题。

现在用流式一步一步分析。

试样收集

骨髓、外周血和粗针活检标本可用于检测浆细胞疾病。

骨髓也是最常用的样本类型，骨髓采集的质量对结果至关重要。但由于浆细胞疾病的特殊性，其对骨骼的损伤可能导致分布不均。此外，它在收集过程中容易被稀释，在运输过程中容易被破坏(建议使用FlowGuard特殊保存溶液https://kdt.im/PhQvsr，特别是对于浆细胞和淋巴瘤样品)，因此通过流动检测获得的比率通常低于常规。

然而，在分析过程中有必要评估和描述样品质量。简单的方法是通过髓样和淋巴样前体细胞的比例，或者通过不同阶段中性粒细胞杆的比例来评价样品质量。

样品制备

裂红再染，或者染再裂都可以。如果样品的细胞密度较低，为了收集足够的细胞，建议使用前一种方法，但应注意使用无固定剂的氯化铵裂解液。

不推荐密度梯度离心，容易导致浆细胞丢失。

无论是表面还是细胞质轻链和免疫球蛋白染色都需要大体积冲洗(实验表明至少需要2次，10倍于PBS体积，建议3次)。

测试方案和设置门

原则上至少要有以下表面标记，加上胞内光链，具体荧光配色可以根据自己的型号灵活搭配:

在设置门上，首先通过CD38/时间参数图选择流体流动的稳定区域，然后FSC-A/FSC-W和SSC-A/SSC-W消除粘连，然后通过CD38/CD138和CD38/CD45散点图选择浆细胞进行分析:

判断浆细胞是良性还是恶性，首先根据上述检测方案表中正常和异常浆细胞的特征，其次根据细胞内轻链的克隆性(这一点很重要，如果浆细胞表面标志物表达正常，但细胞内轻链为克隆性，则很可能是淋巴浆细胞性淋巴细胞瘤/华氏巨球蛋白血症)

由于免疫靶向治疗的流行，CD38经常被用作靶点，导致一些复发患者CD38呈阴性变化。所以在设置门的时候要特别注意CD38-区。如有必要，应使用一些替代的门设置抗体，如CD319、CD229和CD54。

随着多色流的普及和颜色的增加，抗体的质量控制尤为重要。如果省略抗体或者抗体质量不好，可能会导致结果解读出现问题。那么如何保证呢？很简单，利用内部控制，这是我们在免疫表型中需要熟练掌握的。浆细胞免疫表型的这些CD分子基本上可以找到正常细胞的内部控制。比如CD19可以用正常B细胞作为阳性对照，CD56可以用正常NK细胞作为阳性对照，CD81可以用正常B细胞前体作为高表达对照，CD117可以用髓样前体作为内部对照，肥大细胞中CD117的高表达也是一个内部对照指标。

如何解读报道？

1.浆细胞的比例。

正常浆细胞与异常浆细胞的比例要报告，因为发现有10 ~ 15%的患者有正常浆细胞，如果正常浆细胞与总浆细胞的比例总是>:5%，往往预后更好，PFS和OS更高。

循环的浆细胞也是很好的嫩肤。循环浆细胞水平与早期预后有关。对于MGUS病患者，循环浆细胞的定量测定是疾病进展与否的关键指标。

2.与预后相关的表型

CD117:CD117的表达可能与预后良好有关。13q -和t(4；14)往往与CD117阴性密切相关。

CD28:常与17p-和t(14；16)相关性，PFS和OS短。

CD20+CD56:和t(11；14)、髓外浆细胞病和浆细胞白血病。

CD81:预后差。

机器可读字典

目前MM的MRD检测已经高度规范化。下面是几个由不同组织组织的标准化方案。你可以参考他们:

至于分析，类似于之前的免疫表型，同时报道了异常浆细胞与正常浆细胞的比例。

参考文献:Tute，r .，Rawstrom，a .，&；欧文，R. (2018)。浆细胞骨髓瘤和相关疾病。在A. Porwit & ampM. Béné (Eds .)，多参数流式细胞术在血液系统恶性肿瘤诊断中的应用(第128-139页)。剑桥:剑桥大学出版社。doi:10.1017/9781316218549.009

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