【斑马鱼怎么养】浅谈保健食品功能评价新星—

作者：张勇，张勇

产业的活力来自创新。对于保健食品行业来说，创新创造了什么？怎么做？一直是保健食品人努力寻找的方向。

国家有关监督管理部门同样也是在保障大的食品安全的前提下，严格监管的同时，努力为行业的长足发展谋划着。近来，国家市场监督管理总局就《保健食品人群食用试验伦理审查工作指导原则（2020年版）征求意见稿》、《保健食品功能评价指导原则（2020年版）征求意见稿》等四个文件公开征求意见，其中《保健食品功能评价指导原则（2020年版）征求意见稿》就保健食品功能评价的主题内容和适用范围，保健食品功能评价的基本要求，保健食品动物试验的基本要求，保健食品人体试食试验的基本要求，和评价保健食品功能时需要考虑的因素等五个方面公开征求意见。其中，关于保健食品动物实验的基本要求如下：　　

　　1 对实验动物、饲料、实验环境的要求　　

　　1.1 根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，应使用适用于相应功能评价的动物品系，推荐使用近交系动物。　　

　　1.2 动物的性别、周龄依实验需要进行选择。实验动物的数量要求为小鼠每组10－15只（单一性别），大鼠每组8－12只（单一性别）。　　

　　1.3 动物及其实验环境应符合国家对实验动物及其实验环境的有关规定。　　

　　1.4 动物饲料应提供饲料生产商等相关资料。如为定制饲料，应提供基础饲料配方、配制方法，并提供动物饲料检测报告。　　

　　2 对给予受试样品剂量的要求　　

　　各种动物实验至少应设3个剂量组，剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍（特殊情况除外），受试样品的功能实验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。　　

　　3 对受试样品给予方式的要求　　

　　必须经口给予受试样品，首选灌胃。灌胃给予受试物时，应根据试验的特点和受试物的理化性质选择适合的溶媒（溶剂、助悬剂或乳化剂），将受试物溶解或悬浮于溶媒中，一般可选用蒸馏水、纯净水、食用植物油、食用淀粉、明胶、羧甲基纤维素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其他溶媒应说明理由。所选用的溶媒本身应不产生毒性作用，与受试物各成分之间不发生化学反应，且保持其稳定性，无特殊刺激性味道或气味。如无法灌胃则可加入饮水或掺入饲料中给予，并计算受试样品的给予量。　　

　　应描述受试物配制方法、给予方式和时间。　　

　　在这里，我向您介绍一种新的脊椎类模式动物明星：斑马鱼。　　

　　斑马鱼，一种身材玲珑纤细的热带淡水鱼，因其体侧长有像斑马一样纵向的暗蓝色与银色相间的条纹而得名。它长3-4cm，纺锤形，头小而尖，短吻，原产于喜马拉雅山南麓的印度、巴基斯坦、孟加拉和尼泊尔等南亚国家。它是环境监测的哨兵，是生物发育学家的助手，是临床医学研究的新秀。（图一：斑马鱼照片）

图一：斑马鱼照片

　　斑马鱼作为一种新型的模式动物，其具有其他动物不可比拟的优势，它被美国国立卫生院列为继小鼠和大鼠之后的第三大模式生物，并且受到欧美食品药品监督管理部门认可，通过GLP认证。OECD认定斑马鱼胚胎毒性测试为评价化学品毒性最敏感的体内方法。至今OECD和ISO共发布了10项鱼类（斑马鱼）化学品毒性检测标准。特别值得一提的是，根据欧盟动物保护法，出生5天以内的斑马鱼胚胎和幼鱼不属于动物，可用于替代哺乳动物测试，符合3R(替代、减少、优化)原则。　　

　　由于斑马鱼饲养成本低、产卵量大，加之体外受精、发育周期短、透明易观察等优点，已在基础研究、药物开发、食品安全、环境保护等众多领域有了广泛应用。近年来，斑马鱼作为国际公认的，适于功效性评价的新型脊椎类模型动物，可为各种食品评测安全性和其他功效属性。　　

　　斑马鱼生理、发育和代谢与哺乳类动物高度相似，基因与人类基因的同源性达87%，能可靠模拟和预测人类生理、病理过程（图二：斑马鱼基因与人类基因的同源性87%）。而且，斑马鱼是公认的生态毒理学模型。在上个世纪70年代，国外已经开始应用斑马鱼进行重金属和有机物的急性毒性研究。同时，除了毒性，斑马鱼还被用来评估食物成分的生物活性等。我们看到，越来越多的生物活性成分在食物中被日益发现，通过一些活性成分的配比形成的特殊食品已渐渐走入人们的生活。与此相关的，食品研究领域存在着许多难题，例如：如何区分活性化合物，如何推断活性化合物是否具有生物学特性，并且其安全性是否可靠等。所以研究确认食品的有效活性成分，并对其进行安全性评价，是目前食品研究领域的一个重要内容。包括对食品、食品提取物和从食品中分离出来的分子进行功能测试等。

图二：斑马鱼基因与人类基因的同源性达87%

　　斑马鱼检测技术是FDA、EPA、EURL ECVAM等国际组织认可的检测技术，并在《Nature》等学术期刊发表。很多国外公司如默克、诺华、强生等均拥有自己的斑马鱼实验室，用于他们的产品研发。目前，在中国，斑马鱼技术连续获得中国科技部“重大新药创制”专项资助，已颁布斑马鱼实验相关的13个标准，并且在食品安全性评价、活性成分筛选及作用机制研究等方面被广泛应用，如代谢异常、抗氧化、免疫调节、神经保护等相关的营养保健食品的研发与检测上发挥着有效作用。（表一：可以用斑马鱼评价的保健食品功能）　　

表一：可以用斑马鱼评价的保健食品功能

保健食品功能	可以用斑马鱼模型评价的指标
增强免疫力	中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、巨噬细胞吞噬功能
改善睡眠功能	镇静作用、睡眠改善作用
辅助降血糖	血糖
辅助降血脂	降血脂作用
减肥功能	脂肪吸收抑制作用、脂质代谢促进作用、胰脂肪酶活性抑制作用
抗氧化功能	ROS清除作用
对化学性肝损伤的辅助保护作用	化学性肝损伤(酒精肝)模型：肝脂肪变性程度，肝脏大小，卵黄囊吸收（肝功能）
提高缺氧耐受	缺氧条件下运动能力、亚硝酸钠中毒存活实验、缺氧引起的红细胞增多症的改善
缓解视疲劳	斑马鱼眼部凋亡情况
增加骨密度功能	骨钙含量增加作用、骨骼发育促进作用、软骨发育促进作用
润肠通便	肠蠕动功能评价
保护胃粘膜损伤	肠道炎症的改善，肠黏膜、肠腔扩张的改善作用
调节肠道菌群	肠道菌群数量
改善营养性贫血功能	红细胞数量
清咽功能	抗炎作用
促排铅功能	排铅作用
辅助改善记忆功能	改善运动功能障碍、提高反应能力
缓解体力疲劳	运动功能、乳酸、ATP酶活性
其他新功能	辅助降尿酸，抗雾霾作用，改善血液粘稠度，保护血管，促进伤口愈合