血球计数板 利用血球计数板计算藻细胞数量

血细胞计数板计数藻细胞密度是一种常用的计数方法。下面介绍用血细胞计数板计数藻细胞密度的操作步骤。

血细胞计数板的结构；

血细胞计数板由优质厚玻璃制成，每个计数板通过H形凹槽分成两个相同的计数细胞。计数池两侧有支撑柱，用专用盖玻片覆盖，形成高度为0.1mm(以下)的计数池:

计数分为25个中间方块，每个中间方块又分为16个小方块。计数区的边长为1mm，面积为lmm2，每个小方块的面积为1/400mm2。

盖玻片盖好后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方块的体积为1/4000 m3(下):

计算面积-红色区域由16个1/400的小方块组成

计算步数:

1.取一块干净的血细胞计数板，用盖玻片覆盖计数区。

2.用20μl移液管吸取Lugol固定液固定的藻液(如果浓度过高，稀释)，从计数板中间平台两侧的凹槽沿盖玻片下缘滴一小滴(如下图):

样品添加示意图

3.让细胞沉淀在计数板上，不再随液体漂移。将血细胞计数板放在显微镜台上，并夹紧。找到低倍显微镜下的计数区后，切换到高倍显微镜。

4.计算下图中的区域(25个区域中的5个)。

红色部分显示实际计数区域

5.每个样品重复计数3份。

6.计算。计算公式如下:

注意事项:

1.为了保证计数的准确性，避免重复计数和丢失记录，计数时对网格线上的单元格的统计有统一的规定。比如，藻类细胞位于一个大格子的双线上，计数的时候会对上面的线、下面的线、左边的线、右边的线进行计数，减少误差。也就是说，这个格子的上、左线上的单元格在这个格子里算，而这个格子的下、右线上的单元格在这个格子里不算(下图):

计数规则示意图

2.为了清理计数视野，可以在水中加入一些染料或过滤器。显微镜下对比度会更大。不要用投影光源反射光线。

3、只取样几微升，用移液管。

4.使用血细胞计数板一段时间后，显微镜下看不清网格。每次使用后，用稀盐酸或酒精清洗。

5.先盖膜，再滴样品，然后用吸水纸吸住，会使藻类在计数室内均匀沉降，计数时误差会很小。如果盖玻片与样品溶液接触，计数板上的藻类分布会改变位置，变得不均匀。

6.血细胞计数板专用盖玻片不同于普通盖玻片。血液盖玻片的规格是22*26*0.5mm，最常用的盖玻片是18*18*0.2mm，还有20*20*0.2mm，22*22*0.2mm，24*24*0.2mm，不能用普通盖玻片

(1)重量不同，用血细胞计数板计数的原理是单位体积的细胞数。取样后，应保证槽内体积为0.1微升，如果太轻，盖玻片可能会漂浮，从而影响总体积，导致计数不准确。

(2)边长可以不同。由于计数板中心的两排凸出部分比两端低，如果盖玻片不够长，由中心而不是两端支撑，导致取样后液体高度(正常1/250mm)发生变化，从而影响总体积，计数不准确。

原文见下文“阅读原文”。