环己基氨基磺酸钠 气相色谱仪测定环己基氨基磺酸钠含量

气相色谱法测定甜蜜素

1原则

用水提取食品中的甜蜜素。甜蜜素与亚硝酸在硫酸介质中反应生成亚硝酸环己醇，用气相色谱氢火焰离子化检测器分离分析。保留时间为定性，外标法为定量。

2试剂和材料

除非另有规定，本方法中使用的所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的二次水。

2.1试剂

2.1.1正庚烷。

2.1.2氯化钠。

2.1.3石油醚:沸程30℃~60℃。

2.1.4氢氧化钠。

2.1.5硫酸。

2.1.6亚铁氰化钾{k 4 3h2o}。

2.1.7硫酸锌。

2.1.8亚硝酸钠。

2.2试剂制备

2.2.1氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠20g，溶于水，稀释至500mL，混匀。

2.2.2硫酸溶液:小心地将54毫升硫酸加入400毫升水中，然后加水至500毫升，混合均匀。

2.2.3亚铁氰化钾溶液:称取15克亚铁氰化钾、溶于水，稀释至100毫升，混匀。

2.2.4硫酸锌溶液:称量试剂相当于30g硫酸锌，溶于水，稀释至100mL，混匀。

2.2.5亚硝酸钠溶液:称取亚硝酸钠25g，溶于水，稀释至500mL，混匀。

2.3标准品:甜蜜素标准品:纯度≥99%。

2.4标准溶液的制备

2.4.1环己基氨基磺酸标准储备溶液:精确称量0。5612g环己基氨基磺酸标准溶液，溶于水，调至100mL，混匀。1.00mL这种溶液相当于5。00mg环己基氨基磺酸。在1℃~4℃冰箱中保存12个月。

2.4.2环己基氨基磺酸标准溶液:准确取20。0mL环己基氨基磺酸标准原液，加水稀释，调至100mL，混匀。在1℃~4℃冰箱中保存6个月。

3仪器和设备

3.1气相色谱仪:配有FID。

3.2涡流混合器。

3.3离心机:转速≥4000转/分。

3.4超声波振荡器。

3.5样品粉碎机。

3.6个10 μ L微量注射器。

3.7恒温水浴锅。

3.8平衡:灵敏度1mg，0。1mg。

4个分析步骤

4.1样品溶液的制备

4.1.1液体样品的处理

4.1.1.1摇动普通液体样品后，称重25。0克样品，用水定容至50毫升备用。

4.1.1.2含二氧化碳的样品:重25。将0克样品放入烧杯中，在60℃水浴中加热30分钟以除去二氧化碳，让其冷却，用水定容至50毫升以备后用。

4.1.1.3含酒精样品:重25。0克样品放入烧杯中，用氢氧化钠溶液、60℃水浴加热30分钟，去除酒精，冷却，定容至50毫升备用。

4.1.2固体和半固体样品的处理

4.1.2.1低脂低蛋白样品:重3.00g~5。00克破碎并充分混合的样品，并以50毫升离心

4.1.2.2高蛋白样品:冰棒、冰淇淋等。分别放入250毫升烧杯中，融化后搅拌均匀，称重；体重3。00g~5。将00克样品放入50毫升离心管中，加入30毫升水，超声提取20分钟，加入2毫升亚铁氰化钾溶液，混合均匀，然后加入2毫升硫酸锌溶液，混合均匀，离心10分钟，过滤，用水洗涤残渣，收集滤液并使其恒定至50毫升，混合均匀备用。

4.1.2.3高脂肪样品:重3。00 g到5。将00克破碎并混合均匀的样品放入50毫升离心管中，加入25毫升石油醚，摇匀，用超声波提取3分钟，然后混合均匀，离心10分钟，弃去石油醚弃去石油醚，在60℃水浴中蒸发除去石油醚，向残渣中加入30毫升水，混合均匀，用超声波提取20分钟，加入2毫升亚铁氰化钾溶液，混合均匀，然后加入2毫升硫酸锌溶液，混合均匀， 离心10分钟，过滤，用水洗涤残渣，收集滤液并定容至50毫升，混合均匀备用。

4.1.3衍生准确地去除10.0毫升液体样品溶液、将固体和半固体样品溶液放入带盖的50毫升离心管中。将离心管放入试管架上的冰浴中5分钟后，加入5.00毫升正庚烷2。5毫升亚硝酸钠溶液和2。5mL硫酸溶液，盖紧离心管，摇匀，置于冰浴中30分钟，期间摇匀3 ~5次；加入2.5g氯化钠，盖上盖子，在涡旋混合器上摇动1分钟，低温离心10分钟，或低温静置20分钟，直至澄清分层，然后取上清液储存在1℃~4℃的冰箱中进样。

4.2标准溶液系列的制备和衍生化

精确转移0.50mL，1。00mL，2。50mL，5。00mL，10。0mL和25。向50毫升容量瓶中加入0毫升1.00毫克/毫升环己基氨基磺酸标准溶液，加水至恒量。制备的标准溶液的系列浓度为0。01毫克/毫升，0。02毫克/毫升，0。05毫克/毫升，0。10毫克/毫升，0。20毫克/毫升和0。50毫克/毫升。使用时，准备衍生化。准确取出10.0毫升标准系列溶液，并按照中的方法进行衍生。1.3).

4.3决心

4.3.1色谱条件

4.3.1.1色谱柱:弱极性应时毛细管柱或等效列。

4.3.1.2柱温升高程序:初始温度保持在55℃3分钟，10℃/分钟至90℃0.5分钟，20℃/分钟至200℃3分钟。

4.3.1.3进样口:温度230℃；进样量为1 μ L，进样不分流/分流，分流比为1∶5。

4.3.1.4探测器:氢火焰离子化检测器，温度260℃。

4.3.1.5载气:高纯度氮气，流量为12。0毫升/分钟，尾吹20毫升/分钟。

4.3.1.6氢气:30毫升/分钟；空气体330mL/min。

4.3.2色谱分析

分别吸取衍生化处理后不同浓度标准系列溶液的上清液1μL，注入气相色谱仪，测定不同浓度受试物质响应值的峰面积，以浓度为横坐标，以环己醇亚硝酸盐和环己醇两个峰面积之和为纵坐标绘制标准曲线。1 μ L上清液将衍生化处理后的待测样品在相同条件下进样，定性保留时间，测量峰面积，根据标准曲线得到样品液中的组分浓度；如果样品上清液的响应值超过线性范围，应先用正庚烷稀释，然后注射分析。平行测量的次数不得少于两次。

5分析结果的表达

样品中环己基氨基磺酸的含量根据式计算:

…………………………

其中:

X 1 ——样品中环己基氨基磺酸的含量，单位为克/千克；

C——由标准曲线计算定容样品溶液中环己基氨基磺酸的浓度，单位为mg/mL；

M ——样品质量，单位为克；

V——样品的最终恒定体积，单位为毫升。

计算结果表示为在重复条件下获得的两个独立测量结果的算术平均值，结果保留三个有效数字