a亚型血 关于ABO亚型的检测，这些要点你一定要知道！

ABO亚型是什么？ABO亚型有哪些类型和血清学特征？怎样才能找到ABO亚型？ABO亚型怎么检测？

如果您对上述问题有任何疑问，建议您阅读上海血液中心董翔教授2010年在《中国输血杂志》上发表的经典文献《ABO亚型检测》。看完之后，你会对ABO亚型及其相关检测有一个全面系统的了解。

一、ABO亚型概述

1.1 ABO亚型的定义

ABO亚型是指细分为四种常见人类血型A、B、AB、o的ABO血型，这些亚型必须具有遗传基础和明确的血清学特征。年龄、疾病、妊娠等非遗传因素引起的血型改变不能认为是亚型；同样，有基因改变但不影响血清学特征的ABO血型不能称为亚型。

1.2 ABO亚型的分布

最常见的ABO亚型存在于A型人群中，A型个体大多属于A1型，少数属于Aint和A2型。A2亚型占欧洲A型个体的22%，占南非A型黑人的43%。A2亚型在亚洲人群中相对少见。比如A2在中国上海的A型个体中约占0.5%，日本占0.1%，韩国仅占0.02%。我国A2型个体早期检出率较高，可能受Aint型干扰。Aint可视为A1和A2的过渡型，A2以上，但在血清学上彼此非常接近，甚至难以严格区分。

A2B亚型在亚洲人群中的检出率明显高于A2亚型。A2B占中国上海AB型个体的4%左右，日本占1.6%，韩国占0.6%。与A2型相比，A2B的表型频率比A2型高9-30倍。除了A1、Aint、A2，其他ABO亚型都相当少见。根据现有数据，我国约为1.5/万或略多，B亚型数量明显多于A亚型。

上述亚型不包括孟买型和孟买样型，它们是H基因变异的结果，但考虑到它们引起的ABO血型的异常表现，可以将其归为广义上的ABO亚型。孟买型在中国不同地区的分布比例约为1/8 000~1/16 000。但在常规ABO分型中，由于不使用抗H，通常检测不到孟买样型。

1.3 ABO亚型的类型和血清学特征

已报道的ABO亚型有几十种，除了A2和Aint，A亚型还有A3、Ax、Am、Aend、Ael、Afinn、Abantu、Ay等。b亚型包括B3、Bx、Bm、Bend、Bel等。这些ABO亚型也可以表现为AB型(如“ABx”或“AXB”)；此外，还有cis-ab类型，包括CisAB和b(a)；o亚型为Om型，H抗原表达减少。此外，广义的ABO亚型“孟买”和“类孟买”构成了一个复杂的ABO亚型家族。

我们知道ABO亚型是基于基因的改变，但是现在ABO亚型基因的类型比那些根据血清学分类的要多得多。目前形成亚型的基因单倍型有100多种(Genbank登记的单倍型有200多种，但有重复的和非血清学改变的单倍型)，也就是说每个血清学类别可能包含很多不同的基因类型，不同的基因型往往在血清学表现上产生细微的差异，这就使得血清学方法对其进行严格的分类，而且血清学表现上存在个体差异，同一基因型可以产生略有不同的血清学结果。另外，血清学检测容易受到主客观因素的影响，单纯依靠血清学方法无法确定ABO亚型。

在实践中，虽然我们可以用现有的分类对大多数ABO亚型进行分类，但我们经常会遇到与任何现有亚型的血清学特征不完全一致的情况。在没有明确证据表明这些表现可以定义为新的ABO亚型之前，我们可以根据其主要血清学特征将其纳入现有亚型框架，或者利用一些文献提供的“Aw”和“Bw”的表达方法来淡化不同ABO亚型的血清学特征。

总之，在日常的ABO亚型检测中，通过合理的定义和正确的检测方法对ABO亚型进行分类，仍然是一种非常有用的表达方法。通过这样做，可以大致了解该血样中表达的ABO抗原强度，是否存在不规则的抗A、抗B、抗H，是否存在相应的血型物质等线索，也可以为判断其临床意义和遗传特征提供有意义的信息。

表1中国人群ABO亚型血清学特征及获得性血型变异

二、ABO亚型血清学检测方法和技术

2.1发现ABO亚型——阳性和阴性定型不匹配

一般来说，ABO亚型可以通过正负刻板印象的差异来发现。从“反应”和“非反应”的角度来看，许多亚型与阳性和阴性分型一致，但有些反应较弱，因此可以采用更严格的判断方法检测出更多的ABO亚型。比如试管法检测ABO血型时，作为成年受试者，如果没有血液系统疾病，其正定型在试管法中应具有“4+”强度凝集，否则极有可能是ABO亚型；对于反向分型，如果凝集强度

2.2阳性凝集强度和凝集状态

ABO亚型按血清学分类时，阳性凝集强度和“凝集状态”是非常重要的信息。例如A2亚型与合格的人抗A试剂反应时，可达4+，而Ax型凝集一般≤2+。至于“凝集状态”，主要是指正常凝集和“混合视觉凝集”的区别。

所谓“混合视觉凝集”是指部分细胞凝集，部分细胞不凝集的状态。例如将O型和A型红细胞混合后，加入抗A，在试管中离心，可以模拟混合视野的凝集状态:如果混合视野中凝集的红细胞≥50%，通常判断为A3型或B3型，

2.3抗分型检测出不规则抗甲抗乙

A、B亚型中常见的抗A、抗B不符合ABO系统中抗A、抗B的规律，故称为不规则抗A、抗B..cisab类，如CisAB和B(A)，抗A和抗B的不规则性强，一般在室温下即可反应；而Ax、Bx、Ael、Bel等亚型往往只有弱的、甚至不规则的抗A、抗B，在低温下发生反应。通常需要增加血清量，并在4℃下15-60分钟后显示这些抗体。A3、B3、Aend、Bend等亚型不产生或很少产生不规则的抗A、抗B；至于Am、Bm、Ay、By亚型，根本不产生不规则的抗A、抗B。

在检测不规则抗A和抗B时，往往需要增加血清量，置于4℃以增强反应。血清量的任何增加或将其置于4℃以增强血清学反应必须设定为对照，并与理论上阴性的细胞(如O型红细胞)平行操作。当血清量足够时，应尽量用单个样本的多个A、B、O细胞同时做抗分型，以增加试验的可靠性。

2.4吸收和排放试验

某些亚型可能不凝集为正定型，如Ael、Bel或某些Am、Bm等。，这需要通过吸收和发射测试来验证。吸收发射试验极为敏感，对试验技术要求较高，通常需要设置合适的控制。比较好的控制是与待测细胞平行吸收和发射等量的O型红细胞，然后平行检测发射液中的抗体。

吸收发射试验也可用于确认反应强度接近正常的A、B抗原，如B(A)血型中的B抗原，仅通过正定型难以与AB型中的B抗原相区分。只有通过吸收发射试验才能证明B抗原吸收抗B能力弱，发射抗B能力强，从而判断不是正常的B抗原。吸收释放试验最好的抗体是不含冷抗体的人抗血清，因为市售单克隆抗体不能保证与所有ABO亚型抗原反应，也不能保证非特异性吸附。

特别需要指出的是，应尽可能用1滴2%~5%的相应红细胞进行反应，反应放置至少30 min(最好在4℃)后才能读出最终结果。

2.5使用抗A1和抗AB

抗A1和抗AB也将用于ABO亚型鉴定。A2、A3、Ax、Am、Aend、CisAB、B(A)亚型和抗A1的红细胞不凝集，但正常A、AB红细胞和抗A1的凝集强度可达4+。抗AB主要用于鉴别Ax和Bx血型。与抗-A和抗-B相比，抗-AB分别与Ax和Bx红细胞有较强的凝集强度。

2.6使用抗氢

抗H蛋白在ABO亚型的鉴定中起着重要作用。对于非AB亚型，H抗原的强度通常更强。与混合O、混合B红细胞相比，亚型H抗原强度更接近O红细胞。一般我们不需要混合A型红细胞和亚型细胞来比较H抗原的强度，因为A型可能有更多的Aint类型，H抗原的强度与某些亚型细胞的强度相似。

如果发现非AB亚型细胞，其H抗原极弱甚至无法检测到，很可能是孟买样或基于H抗原(Hm)弱表达的亚型。对于AB亚型，如AxB或ABx，H抗原通常较弱。如果发现H抗原强，很可能是CISAB型，如CisAB或B(A)型。

2.7血型物质的检测

一般ABO血型物质是通过唾液检测出来的。唾液要经过预处理(煮沸10分钟，离心沉淀)，用于中和唾液血型物质的抗A、抗B、抗H要标准化，即抗体要用相应的ABO红细胞稀释到2+~3+的凝集强度。

如果使用单克隆抗体进行检测，应使用已知分泌型的唾液作为对照，以防止部分单克隆试剂与唾液中的ABH血型物质中和。亚洲有很多弱分泌个体，可以通过测量唾液中介质物质的效价来区分。

三、ABO亚型的分子生物学检测方法

目前常用的ABO亚型分子生物学检测方法有两种:利用试剂盒检测ABO单倍型的SSP法，已知单倍型的测序分析。

表2中国汉族主要甲、乙、氧单倍型及其特征

从表2可以看出，A型和B型的主要区别在外显子7的4个位点(526、703、796和803)，而中国大多数O型在外显子6的261位有移码突变。目前的分子生物学方法比较耗时，即使是简单的SSP方法，从DNA提取、PCR扩增到电泳分析的整个过程也需要4小时以上。

通过SSP方法，我们可以知道样本中是否存在A、B或O基因，但无法知道具体存在哪些亚型基因。知道特定亚型基因最直接的方法是直接测序ABO基因的外显子6和外显子7。但仍有相当一部分ABO亚型的全外显子基因是正常的，导致抗原表达异常，这可能与ABO基因各外显子的剪切位置和基因5’增强子的变异有关。

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