孢子怎么使用百科看这里!菌种的孢子分离法可以分为哪几个步骤？操作期间应该注意什么？

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孢子分离法是指在无菌状态下，将食用菌的孢子在适当的培养基中萌发成菌丝体，然后通过栽培试验进行比较，获得性质优秀、可用于栽培的纯菌种。

孢子分离法主要是对担孢子或子囊孢子进行分离，而担孢子和子囊孢子均是有性繁殖产生的产物，多数为单核或多核的单倍体，一般可供杂交育种，但通常孢子萌发的菌丝不能直接用于生产。少数担孢子萌发形成异核体菌丝，可以形成子实体，但这些担孢子萌发获得的纯培养物，必须经过栽培试验筛选方能在生产中使用。孢子分离法过程较烦琐，工作量大，所需时间长，且必须通过出菇试验才能筛选出好的菌种。孢子分离法可分为单孢分离法和多孢分离法。

食用菌孢子

（一）孢子采集

选择出菇早、性状典型、生长健壮、成熟度适宜的优良个体作为种菇，最好是第一潮或第二潮菇。双孢蘑菇、草菇等应采摘菌膜即将开裂的子实体，香菇、平菇等则应采摘菇体八成熟即将释放孢子的子实体。种菇选定后，用无菌水清洗菇体表面，晾干，切去多余菌柄，仅留下1.5~2.0cm。常见孢子采集方法如下。

食用菌栽培

1.孢子采集器收集、孢子采集器由玻璃罩（顶部有孔）、搪瓷盘、培养皿、金属支架（插种菇用）和纱布等组成。在搪瓷盘内垫几层纱布，上面放置一个直径为70~90mm的培养皿，其内放入金属支架，培养皿外加盖玻璃罩，玻璃罩顶部孔口用棉塞塞好。将组装好的孢子采集器用双层纱布包起来，经高压灭菌后备用。孢子收集可在接种箱或超净工作台上进行。用75％的酒精棉球对种菇进行表面消毒，再用无菌水冲洗3次，无菌纱布吸干表面水分。用镊子夹住种菇菌柄，使菌褶向下插于孢子采集器的金属支架上，盖上玻璃罩。为了满足种菇开伞弹射孢子时的湿度要求，同时防止杂菌侵入，可在搪瓷盘中的纱布上倒少量无菌水，然后将孢子采集器置于适温下（16-28℃）促进孢子弹射，经1-2d，即可在培养皿中看到落下的孢子印。在无菌条件下，将种菇连同金属支架一起拿掉，盖好培养皿，用透明胶带封上或用纸包扎好备用；若长期保存，可放入冰箱内冷藏。

食用菌栽培

2.三角瓶钩悬法多用于银耳、先准备好已灭菌的装有约1cm厚固体培养基的三角瓶以及金属钩。选取新鲜成熟的耳片，削去耳根及基质碎屑。在无菌操作台上，用无菌水反复冲洗耳片，然后切取肥厚的耳片部位，放入烧杯内，用无菌水再冲洗数次，无菌纱布或吸水纸吸表面水分将处理好的耳片取一小块孕面朝下钩在金属钩上，悬挂于三角瓶内，塞上棉塞。在2325℃条件下培养1-2d.孢子会落在培养基上。无菌条件下，取出金属钩与耳片，塞上棉塞保存备用。

农民在采收银耳

（二）多孢分离

多孢分离法是将多个孢子接种在同一培养基上使其萌发，随机自由交配，从而获得纯菌种的方法。包括斜面划线法和涂布分离法。1.斜面划线法在无菌条件下，用接种环蘸取少量的孢子，在斜面培养基上自下面上轻轻划线避免划破培养基表面；接种完毕，灼烧试管口，塞上棉塞，25℃恒温培养；待孢子萌发出菌丝，并自由配对结合后，挑选长势旺的菌落，转接于新的试管斜面上继续培养，即可得到纯菌种。

新鲜的食用菌

2.涂布分离法按照无菌操作要求，用接种环蘸取少量的孢子，放入装有无菌水的三角瓶中，充分摇匀，制成孢子悬浮液；吸取孢子悬浮液，滴1-2滴于斜面或平板培养基上，转动试管或培养皿使悬浮液均匀分布于培养基表面，或用接种环将培养基上的悬浮液涂布均匀。25℃恒温培养，挑选长势健壮、生长较快的菌落，移接于斜面培养基上培养，即可得到纯菌种。上述两种方法得到的纯菌种，必须进行出菇试验，从出菇的群体中选择优良个体，进行组织分离，方能获得在栽培生产中使用的菌种。

蘑菇栽培

（三）单孢分离

单孢分离法是在采集到大量孢子的基础上，经过稀释，使孢子之间互相分开，各个孢子单独萌发出菌丝。单孢分离方法包括玻片稀释分离法和平板稀释分离法。同宗结合的食用菌而言，单孢分离获得的纯菌种具有结实性，但单孢菌株群体性状分化较大，必须经过出菇试验后，才能挑选优良个体进行组织分离，获得可用于生产的纯菌种；对异宗结合的食用菌而言，由单个孢子发育而来的单核菌丝仅能作为杂交育种的试验材料，绝对不能制备菌种用于栽培生产。