p3 揭秘P3实验室

P3实验室是广东省第二人民医院“手撕病毒”的秘密武器之一。这里每天进行400多项新冠肺炎肺炎核酸检测。病毒是如何在P3实验室被“发现”的？让经济日报-中国经济网记者带您揭开我院P3实验室的神秘面纱。

“这是一个‘零距离’接触病毒的地方。整个实验室完全密封，房间处于负压状态。我们喜欢用‘三流’来形容，即人、物流、空气的单向流动，以保证里面的污染物不会泄漏出去，造成污染。”广东省第二人民医院P3实验室主任林建国说。

“这里”指的是P3实验室。广东省第二人民医院每天进行400多项新冠肺炎肺炎核酸检测。广东省第二人民医院作为国内第一家省级急救医院，拥有WHO国际急救医疗队，具有丰富的抗病毒治疗经验。P3实验室是“手撕病毒”的秘密武器之一。

实验者通过核酸扩增器进行扩增反应。

所有人都是凡人

P3实验室是生物安全三级实验室的简称，P是防护的简称。整个实验室完全密封，内部处于负压状态，这样内部气体就不会泄漏到外面造成污染，也就是“空气流”的单向流动。

根据微生物及其毒素的危害程度，生物安全实验室分为四级:一级最低，四级最高。一级实验室适用于对健康成人无致病作用的微生物；第二级适用于对人和环境有中等潜在危害的微生物；第三级适用于主要通过呼吸道感染严重甚至致命疾病的病原微生物或其毒素；四级适用于对人体高度危险、通过气溶胶传播或传播途径不明，且无有效疫苗或治疗方法的病原微生物或其毒素。

广东省第二人民医院新型冠状病毒核酸检测在P3实验室进行。这个P3实验室的口号是3P，平战结合，与时俱进。平战结合:平时以科研为主，定期进行应急演练。一旦发生疫情，将立即开展应急工作。警钟长鸣:时刻保持清醒的头脑，密切关注全球和国内传染病研究动态，防患于未然。与时俱进:及时跟进国际新知识、新技术、新设备，建设具有国际视野的实验室。

从茧中抽丝——进行艰苦的调查

核酸检测是新冠肺炎诊断肺炎的“金标准”，检测过程中的每一个环节都很微妙，容不得半点马虎。在操作中，实验者面对面前的样本需要“一个个揭开样本，提取核酸”，这无疑是与病毒的正面对抗。

那么，P3实验室的实验者是如何与病毒“战斗”的呢？根据介绍，实验室的检测过程可以分为五个步骤:样品进入“传递窗口”——灭活处理——开盖取芯——扩增反应判断结果——高压灭菌。

第一步是样品进入实验室。在进入P3实验室之前，采集的测试样品必须进入一个特殊的窗口——“传递窗口”，也称为空气闸。它有不能同时打开的双门，以保证样品转移时带入的空气体在双门内被隔离，从而不污染实验室外的环境。样本将在这里的实验室开始它短暂的生命。

第二步是检测前灭活。将样品在56℃水浴中灭活半小时，使病毒蛋白不再具有生理活性，失去感染、致病和繁殖的能力。这使得检测相对安全，但病毒蛋白的基因序列不受影响。

第三步是检测的核心环节——开盖加样提取核酸。

我院检验科副主任技师胡良山是第一个进入P3负压实验室完成设备调试、程序设置、试剂试用等准备工作的人。“在标本处理室，当实验者拿到灭活的样本时，第一个动作是振荡，让拭子上的病毒尽可能多地在培养基溶液中洗脱，然后静置5分钟沉淀。下一步是开盖加样，必须人工操作，需要两个人的高度配合才能完成。一个人拧开样品罐的盖子，另一个人拿着微量吸管吸取样品罐中的微量溶液，放入另一个提取管中，然后拧上管套。”她介绍说，这样，400多个样本要被打开、吸吮、转移400多次，每次都被实验者与病毒面对面地“打开、撕扯”。

“病毒在脱帽和转移过程中非常容易暴露在实验室空气体中。”胡梁山说:“打开盖子加样时，拿着微量移液器的手往往因为戴了双层手套而显得别扭，但要小心。再加上眼罩、面罩、生物安全柜玻璃窗三重屏障，一切动作显得缓慢。由于动作缓慢，手不时颤抖。往往是左手握着右手完成加样。”

人工提取核酸的步骤比较复杂，考验实验者的耐心和谨慎。“核酸提取可以用仪器辅助，但由于需要比较，往往需要人工操作，需要重复离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。其中，打开管套的操作是7次以上，大约需要50分钟完成一次人工核酸提取。”胡梁山说。

第四步，判断结果。提取的核酸被送到核酸检测室，并被放在仪器上。实验者将提取的核酸加入到扩增试剂中，用荧光PCR仪进行RT-PCR反应，分析判断结果是阴性还是阳性需要110分钟左右。

最后，污染物的高压灭菌处理。高压灭菌后，实验过程中产生的污染物作为普通医疗废物处理。

安全防护

让我们看看员工是如何工作的。

一、洁净区穿中间防护服——通过缓冲室进入实验室负压车间，样品在缓冲室处理，核酸提取检测——完成后进行空室和表面消毒，依次脱下防护服，通过淋浴室换衣，返回洁净区。这些步骤都不能省略。

核酸检测的目的是高效、有序和安全。其中，工作人员的安全最为重要。为了确保安全，医院采取了各种措施。一是人员筛选，抗疫动员令下达后，很多人踊跃报名，经过多次筛选，留下的都是身体健康、训练有素的年轻“老兵”；二、岗前安全培训，严格按照要求穿戴防护服，熟悉操作流程；第三，严格执行消毒灭菌制度。医院P3实验室管理员阎秀奎负责日常消毒工作；第四，建立感觉控制主管制度，及时发现负压区工作人员的不适或操作不当，保证工作人员的身心安全。

到目前为止，我院P3实验室尚未出现生物安全问题。

抛弃虚假，保留真实

在P3实验室，任何环节的任何问题都可能导致“假阴性”或“假阳性”。为了保证检测质量，检测结果会经过多次比对和复核。

据报道，检测质量的保证措施在检测前已经开始。采集样本的医务人员必须经过严格的培训和考试后才能上岗。样品的质量与采集技术密切相关，每一帧的动作流程都必须按规定进行。样品采集后的押运工作应由专人按照严格的程序送到实验室。

在测试过程中，实验者认真对待每一项测试，不遗漏任何可疑样本。对于可疑样品，将选择不同的试剂进行审查，以防止“假阴性”；同时在每批实验中随机插入3个以上空白色对照，对阳性样本进行病毒基因测序比较，防止“假阳性”的发生。

检测结束后，实验室会定期随机抽取检测样本送第三方实验室进行检测，并对数据进行对比分析，以保证检测的准确性。

一前一后横扫一切

目前，我院共有21支P3检测队，被称为“侦察兵”。其中70%以上具有硕士以上学历，均接受过分子生物学培训，持有PCR工作证书。

“不像病房里打架的医护人员，他们藏在实验室里，每天都与病毒密切接触，是别人看不到的‘前线’。”林建国说。

据悉，实验室严格遵守《新型冠状病毒诊疗方案》和生物安全要求，检查人员应在P3实验室负压封闭室空佩戴中级防护装备，5小时内不得进食或饮水，并克服负压差和设备过紧引起的头晕、呕吐等症状。

不仅如此，核查人员还必须克服他们的心理恐惧。咽拭子样本采集自疑似患者鼻咽部，可能含有较多SARS-CoV-2。当检查人员从采样罐中取出样本时，病毒在空气体的帮助下很容易在封闭的环境中传播，但他们仍然毫无怨言、无怨无悔地战斗在第一线，并率先通过。