做细胞培养实验的实验室越来越多,计划开展或已经开展的单位或实验室必须做到以下几点。
1.选择正确的培养基
在培养细胞之前,你应该了解你所培养的细胞的来源、类型和名称,查阅一定量的文献,并确定所需培养液的类型以及是否需要添加特殊成分。常用的细胞培养液有DMEM、RPMI1640、F12等。一些常见的细胞基本上可以用这些培养基中的一种培养,有些需要添加某些其他成分。这需要根据不同的细胞类型查找ATCC细胞库或文献,以找到所需的最佳培养物。选择合适的培养基是培养细胞的第一步。
2.了解细胞的生长习性
不同的细胞有不同的生长习性。比如成纤维细胞是贴壁的,有一定的密度依赖性。如果密度小,可能不会增殖,状态差。当接种密度较大时,需要隔天传代,频繁传代会影响细胞状态,再如RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞,悬浮生长,离心取上清液传代即可。总之,只有了解细胞生长习性,正确计数,才能掌握传代的密度。
3.选择优质血清
血清含有细胞生长所必需的生长因子。作为哺乳动物细胞培养的补充,血清的添加非常重要。因此,选择高质量的血清是细胞培养成功的关键!
4.培养基的及时传代和更换
细胞增殖到一定密度后,应及时传代培养,并根据细胞的生长速度和密度及时更换培养基。如果更换过于频繁,培养液浪费,更换不够及时,细胞状态会变差,一般需要隔天更换培养液,可以根据培养细胞的类型进行调整。
5.绝对无菌意识
关注眼前的一切。如果不育意识差,细胞内混有微生物,千里之堤,溃于蚁巢。细菌的生长速度和破坏力会很快占据培养皿,破坏细胞结构。有些初学者会在培养基中添加1%的双抗体。但是不育意识不强,双抗体救不了你的细胞!
6.专注的护理和频繁的观察
这样做,你可以开始提升你的细胞,但再次重申细胞是脆弱的。在饲养细胞的过程中,难免会出现一些意想不到的问题。如果你想成功地培养细胞,请始终考虑它们。
经常观察是不够的,初期一天观察两次。如果出现任何意外情况,及时处理可以保证收获一盘“漂亮”的细胞。
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