第一部分:聚合酶链反应技术的前世[一]
——穆利斯发明聚合酶链反应技术的科学故事
是的,对于生命科学领域的人来说,PCR确实是最基础的实验技术。
但你知不知道,这样一项基础而重要的技术,只出现了30年,比互联网出现的时间(1969年,互联网在世界上的前身ARPAnet建立了连接)还要短!
聚合酶链反应导论
PCR(聚合酶链式反应),中文翻译成聚合酶链式反应,命名为“核裂变链式反应”。反应效果也名副其实,可以通过一对预先设计的引物、耐热DNA聚合酶和反应原料,在体外模拟DNA复制的过程:
→首先,将待扩增的DNA模板加热、变性、熔化;
→当引物冷却到一定温度时,引物退火并与模板序列结合进行扩增;
→通过升高温度,退火引物在DNA聚合酶的作用下延伸。
我们再来复习一下普生课上的这个示意图。很亲切~
“链”的含义是,下一个反应循环中使用的模板是前一个循环的产物,所以待扩增的DNA片段在链式反应中以2 N的几何顺序生长。
虽然PCR的基本原理很简单,但还是有很多故事可以讲。在这个系列中,我们先从PCR发明的历史说起,说说我们最熟悉和不熟悉的PCR。
哪位大教授发明了PCR?
由于聚合酶链反应技术的发明,凯利·班克斯·穆利斯博士获得了1993年的诺贝尔化学奖。
然而,穆利斯从未在任何大学或研究所担任过教授,而是生物技术公司塞特斯的研究员。他的学术生涯不是“训练出来的”。穆利斯在加州大学伯克利分校获得了生物化学博士学位,专攻有机化学合成;但是,这个贪玩的穆利斯先生,似乎在博士阶段做一些“老老实实的工作”。他饶有兴趣地选修了很多天文学和物理学课程,甚至拿着一篇与自然界大爆炸理论有关的论文通过了博士考试(发表后估计《自然》的编辑对他恨之入骨)。
K.B.Mullis出生于1944年,在北卡罗来纳州他祖父的农场长大。他的名字叫凯利,来自他祖先居住的北卡罗来纳州的卡里,他的中间名班克斯和他的父亲C.B .穆利斯一样。母亲把卡里改成了凯利,以避免他的首字母和父亲的一模一样。
小时候,穆利斯和哥哥姐姐们在农场调皮捣蛋:在地窖里探险,在阁楼里玩耍,逗弄奶牛……这时候,穆利斯的生活已经和自然科学无关了,他的童年也不像其他伟大的科学家那样“对身边的自然现象充满兴趣”。1953年,当PCR技术的理论基础——DNA双螺旋模型被提出时,穆利斯和他的朋友们还在农村快乐地玩耍。
中学的时候,穆利斯来到了南卡罗来纳州首府哥伦比亚,开始了一项小小的科学相关活动,就是造火箭!利用妈妈厨房里的糖、当地药店的硝酸钾和不明来源的爆炸引线,穆利斯和他的朋友们在他们自己的院子里设计了火箭。
童年的穆利斯和他自制的火箭
经过反复实验,他们的火箭体积越来越大,最后他们甚至发射了一只青蛙,飞了一英里多!当然,这样的实验有时会让附近机场的飞行员感到不安。1962年,在穆利斯建造火箭的第三年,沃森和克里克因为他们的双螺旋模型获得了诺贝尔奖。
中学时代的课外实践经历让穆利斯迷上了化学。在佐治亚理工学院上大学的时候,穆利斯经常整个下午都在学校的化学实验室里度过;假期里,他甚至和同学一起开了一家有机化学合成实验室,合成有毒或易爆的产品,卖给当地的化工厂。(难道是政府不关心这么危险的事情?嘻嘻,有点阿尔弗雷德诺贝尔的风范~)
在研究生阶段,穆利斯来到加州大学伯克利分校攻读生物化学博士学位,当时遗传密码刚刚被破解。但穆利斯对DNA还是不感兴趣,更别说发表生物化学方面的研究成果了。甚至作为一名生物学博士生,他甚至没有选择分子生物学的课程。相反,他沉浸在天体物理学的课程中,甚至于1968年在《自然》杂志上发表论文阐述他的假说“时间反转的宇宙学意义”。正是这篇文章帮助他通过了博士考试。这个经历估计现在放在国内大学,肯定被老板谈过很多次。
毕业后,穆利斯游历了几个城市,经历了几次失败的婚姻,换了几份不同的工作(写科幻小说,杀老鼠……)。直到1979年,他才找到一份永久的工作,在塞特斯生物技术公司负责DNA合成,并为公司其他部门的研究提供长度约为20nt的DNA片段。直到35岁,穆利斯才与DNA相连。
下面的故事从他在塞特斯仍然“放荡不羁”的研究工作开始...
参考文献:
1.诺贝尔化学讲座,1991-1995,编辑博·格·马尔默斯特伦,世界科学出版公司,新加坡,1997
2.诺贝尔奖。诺贝尔奖,1993年,编辑托雷·弗林斯米尔,[诺贝尔基金会],斯德哥尔摩,1994年
3.PCR发明前后。(2011).从http://blog.sina.com.cn/s/blog_7fc616fd0100ybn1.html取回
4.PCR发明者的故事,朋克获得了诺贝尔奖。(2007).从http://blog.sina.com.cn/s/blog_6408a8260100wlx5.html取回
感谢在此阅读~ ~
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