细菌试验 常用的几种生理生化鉴定实验

大分子物质的水解反应

大分子淀粉、蛋白质和脂肪不能被生物直接利用，大分子物质必须被产生的胞外酶分解后才能被微生物吸收利用。只要胞外酶是水解酶，就可以通过加水把大的物质分裂成更小的化合物，运输到细胞中。

淀粉酶将淀粉水解成糊精、二糖和单糖。脂肪酶将脂肪水解成甘油和脂肪酸；蛋白酶将蛋白质水解成氨基酸。这些过程可以通过观察细菌菌落周围物质的变化来证实。淀粉暴露在碘溶液中会产生蓝色，但用碘测细菌水解淀粉的区域不会产生蓝色，说明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生的脂肪酸可以改变培养基的酸碱度，降低培养基的酸碱度。添加到培养基中的中性红色指示剂会使培养基由浅红色变为深红色，表明细胞外存在脂肪酶。

糖发酵试验

糖发酵试验是一种常用的鉴定微生物的生化反应，尤其在肠道细菌的鉴定中。大多数细菌可以利用碳水化合物作为碳源和能源，但它们分解碳水化合物的能力差异很大。有些细菌可以分解某些糖类产生有机酸(如乳糖、乙酸、丙酸等)。)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等。);有些细菌只产生酸，不产生气体。比如大肠杆菌可以分解乳糖和葡萄糖产生酸和气体；伤寒杆菌分解葡萄糖产生酸而不产生气体，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产生酸和气体，但不能分解乳糖。

发酵培养基含有蛋白胨、指示剂(溴甲酚紫)、倒置韩德小管和不同的糖。当发酵产生酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色(pH6.8)变为黄色(pH5.2)。气体的产生可以通过倒置韩德小管中气泡的存在或不存在来证明。

IMViC反应

IMViC反应是吲哚试验、甲基红试验、伏安试验和柠檬酸试验的缩写。这四个实验主要用于快速鉴定大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌检验。

吲哚试验:有些细菌用氨酶染色，可以分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚(靛蓝基质)。吲哚能与对二甲氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚，呈红色。

甲基红试验:在葡萄糖代谢过程中，一些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、琥珀酸等。，使培养基的酸碱度降至4.5以下，加入甲基红指示剂后会变红。如果细菌分解葡萄糖产生的酸较少，或者生成的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、酮、气体、水)，培养基的pH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈橙色。这种试验常与V-P试验一起使用，因为前者对细菌呈阳性，而后者通常呈阴性。

伏安法(双乙酰)试验:部分细菌可转化如下:葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇→ 2，3-丁烯二醇，在碱存在下氧化成双乙酰，后者与蛋白胨中的胍类化合物反应生成粉红色化合物。本实验的目的是确定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。

柠檬酸试验:当细菌以铵盐为唯一氮源，柠檬酸盐为唯一碳源时，如果细菌能以这些盐为氮源和碳源生长，就可以用柠檬酸钠生成碳酸盐，碳酸盐会与铵盐生成的氨反应生成NH4OH，从而使培养基呈碱性，指示剂溴百里酚蓝(BTB)由淡绿色变为深蓝色。

生化反应种类繁多，操作复杂，过程繁琐，耗时长。目前市场上已经出现了生理生化反应试剂盒，但是市场上的试剂盒产品质量难以保证。那么如何选择质量高、操作简单、结果准确的鉴定试剂盒呢？

洁仪生物推荐一款进口产品HiMedia公司(国际知名微生物公司)生产的HiBio-ID系列微生物生化识别卡。

一张生化身份证上有12或24个生化检验。细菌试验包括IMViC试验:吲哚(I)、甲基红(M)、VP(V)、柠檬酸利用(C)，常用于鉴别肠杆菌，统称IMViC试验、碳水化合物代谢试验、氨基酸代谢试验、苯丙氨酸脱氨酶试验。

尿素代谢实验(脲酶实验)、丙二酸代谢实验、ONPG实验(β-半乳糖苷酶实验)

，葡萄糖醛酸酶检测实验，硝酸盐还原实验，叶琳水解实验，硫化氢产生实验，运动检测实验，过氧化氢酶实验(触酶实验)，氧化酶实验，耐盐实验，吡咯烷酮酶实验(PYR实验)，碱性磷酸酶实验。

识别卡的选择取决于各种因素，如生长状态、生长时间、菌落特征、革兰氏染色等。HiBio-ID系列微生物生化识别卡操作简单，节省了大量实验试剂的准备时间。所需试剂全部包含在试剂盒中(例如过氧化氢酶接触试验需要自己准备，因为过氧化氢不稳定)，无需其他仪器即可手动读取。高效，一次孵育即可得出结果。实验结果准确可靠。