牛奶抗生素检测 原料奶中抗生素残留及快速检测方法

摘要:近年来畜牧业发展迅速，“绿色”、“环保”、“有机”食品在普通民众中广受欢迎。牛奶作为营养最全面、消化率最高的有机食品之一，其质量和安全性备受关注。抗生素在畜牧业中的广泛应用不可避免地会导致牛奶中的残留。抗生素残留不仅危害人体健康，还会影响牛奶质量，造成经济损失。本文综述了牛奶中抗生素的来源、危害、现状及快速检测方法。

关键词:牛奶；抗生素残留；微生物法；高效液相色谱；免疫法；魅力罗莎检测系统

简介:牛奶与人们的生活息息相关。牛奶中的抗生素残留已经引起了世界各国政府和食品安全机构的广泛关注。为了保证人们饮用牛奶的健康和安全，开展了牛奶中抗生素残留检测技术的研究，寻求一种简单、快速、准确、灵敏的检测方法，以满足日益严格的残留限量要求。

抗生素被广泛用作动物药品和饲料添加剂，这必然导致动物性食品中抗生素残留，尤其是牛奶中的抗生素残留引起了消费者的关注。世界上许多国家，如美国、欧盟和日本，都要求对原料奶中的抗生素进行强制性检测。欧盟对最高残留量(MRL)做了详细规定，为4微克/千克。因此，只有不断开发快速、准确、灵敏的检测方法，才能满足日益严格的残留限量要求，保证牛奶的食用安全。

1牛奶中抗生素残留的来源

一般认为，对哺乳期奶牛用药不当或对停药期不注意是造成牛奶中抗生素残留的重要因素，尤其是采用乳房灌注治疗乳腺炎时，容易造成牛奶中抗生素残留。在奶牛饲料中添加饲料添加剂是非常常见的，其中含有一定比例的抗生素，其主要作用是预防疾病，这是牛奶中抗生素残留的重要原因。

1983年，伊根调查表明，用抗生素处理过的奶牛使用的挤奶器给正常奶牛挤奶，会使抗生素残留在正常奶牛的乳汁中，所以挤奶是乳汁中抗生素残留的另一个原因。此外，为了防止牛奶在高温季节酸败，一些非法奶农经常在牛奶中掺杂各种抗生素，这也是牛奶中抗生素残留的一个来源。

2原料奶中抗生素残留的危害

抗生素在畜牧业中的广泛应用必然导致牛奶中抗生素残留。一般抗生素对热的稳定性较高，牛奶不会被热杀菌破坏，所以掺有抗生素的牛奶加工成乳制品后仍有大量抗生素残留。如果经常喝这种牛奶，会被抗生素反复刺激，变得过敏。

原料乳中的抗生素残留不仅影响乳制品的加工(如严重干扰发酵乳制品的生产，影响奶酪、黄油和发酵乳的发酵和后期风味形成)，而且长期服用含有低剂量抗生素残留的乳制品相当于频繁服用低剂量抗生素，会导致耐药性增加，免疫力下降。有些过敏体质的人还可能出现荨麻疹、发热甚至过敏性休克，可能危及人体健康。

要完成对奶源的有效管理，这种管理理念不仅是在我国奶源不足、分散饲养、管理困难的现状下最好、最有效的管理模式，也是我国未来实行大规模集中饲养管理的必然趋势和基础。

3原料乳中抗生素残留的现状

根据近几年国内不同城市的调查，抗生素残留奶比较严重，无论是城市销售的鲜奶还是巴氏奶。从超标情况来看，超标率在10%以上的有10种，超标率在20%以上的有8种。

牛奶中残留的抗生素主要是青霉素类和磺胺类，其中CEPA和PEN-V最为严重，检出率在35%以上。其次是甲肝、PEN-G、CIF、SD和SMZ，检出率均在20%以上。

牛奶中抗生素残留问题越来越受到国际社会的关注。过去，我国对牛奶中抗生素残留的卫生指标没有明确的规定。直到2001年10月，农业部颁布实施了《无公害食品鲜奶行业标准》，明确了鲜奶卫生指标中“不得检出抗生素”。然而，目前这一行业标准在中国没有得到严格执行，导致牛奶和乳制品中抗生素残留的问题没有得到解决，这引起了人们对牛奶安全性的关注，并成为越来越多关注的焦点。

从以上情况可以看出，我国牛奶中抗生素残留的现状不容乐观。有关部门应加强对牛奶生产的管理，有效检测和监测牛奶中的抗生素残留，确保人们饮用牛奶的卫生和安全。

4原料乳中抗生素的分类

抗生素有成千上万种。临床常用的抗生素有上百种，主要分为β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、磺胺类。

在发达国家，牛奶中抗生素残留的问题长期以来一直受到关注。联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)早在1969年就提出了处理各种动物性食品中抗生素残留的允许标准。美国食品药品监督管理局(FDA)规定，牛奶中的抗生素残留不得超过0.006国际单位/毫升，所有超过允许标准的牛奶和乳制品都应丢弃，这就要求A级巴氏奶原料中不得有抗生素残留，原料奶的抗生素检测是强制性的。

原料乳中抗生素的5项控制措施

目前，应采取以下措施减少和避免原料乳中抗生素残留:

第一，兽医指导下的合理用药不能把使用抗生素作为预防疾病的唯一措施；

二是使用合格的饲料产品，避免在不知情的情况下使用含有抗生素的产品；

三是严格执行用药后停药期；

第四，加强饲养管理，病牛分开喂，不要混用挤奶设备，保证安全挤奶。同时控制奶牛乳房炎的发病率，减少抗生素的使用。

原料乳中抗生素的检测方法

在奶牛的生长过程中，经常使用β-内酰胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素治疗疾病。由于各种原因，其在动物细胞、组织、器官或食用产品(如鸡蛋、牛奶)中的残留直接影响人体健康。

抗生素的分析方法主要有微生物法、免疫法和高效液相色谱法。微生物和免疫学方法因其低成本和省时而被广泛用于筛选实验。高效液相色谱主要用于确证实验。

(1)微生物法

微生物检测是一种广泛使用的方法。其检测原理是根据抗生素对微生物生理功能和代谢的抑制作用，对样品中抗生素残留进行定性或定量检测，如TTC法(氯化三苯基四氮唑法)、BSDA法(嗜热脂肪芽孢杆菌纸片法)、PD法(纸片法)、STOP法(拭子法)。

其中，TTC法是检测牛奶中抗生素残留的常用方法，也是我国鲜奶抗生素残留检验标准中规定的检测方法。检测成本低，但检测时间长，肉眼检测结果易产生误差，操作复杂，结果易受嗜热链球菌和消毒剂数量的影响，灵敏度低。

(2)高效液相色谱

高效液相色谱(HPLC)简单快速，可以检测牛奶中几乎所有的抗生素。2008年12月31日，我国发布了一系列牛奶中抗生素的检测方法(GB/T22975-2008)，并于2009年5月1日正式实施。该标准规定了牛奶和奶粉中的阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、氯唑西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、萘夫西林和双氯西林等抗生素。

高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时具有分离、定量和定性(分子结构信息)的功能，灵敏度高，特别适合准确测定。但其检测程序复杂，检测成本高，一般在大型实验室使用。

此外，随着接口技术的提高，质谱作为一种质量流量检测器被广泛应用于残留物分析。电化学检测器也被用来检测邻氯青霉素、头孢菌素和青霉素。与常规理化分析技术相比，免疫分析技术最突出的优点是操作简单、速度快、分析成本低。

(3)免疫测定

目前随着牧场规模的扩大，对原料奶中抗生素的检测要求越来越严格，美国CHARM公司的先进技术已经引进中国。结合RIA(放射免疫分析)技术、ELISA(酶结合反应)技术、生物发光技术和液体闪烁技术，介绍了快速检测食品中抗生素残留和黄曲霉毒素的CHARM II系统，实现了食品快速检测的飞跃。

CHARM II是基于ELISA技术，所以一种抗体只能特异性结合某些抗生素，即使样品中有其他抗生素，也不会造成干扰，而且抗体可以识别类似抗生素的共同结构——母环，所以几乎可以检测β-内酰胺类、磺胺类、四环素类、大环内酯类、氯霉素、氨基糖苷类、新霉素、大观霉素等抗生素以及黄曲霉毒素。CHARM II不需要样品处理，8分钟即可得到检测结果，检测限符合欧盟、美国、中国的限值要求。

检测原理:CHARM ROSA抗生素残留快速检测仪包括抗生素检测条、培养箱和阅读器，主要根据竞争性受体-配体免疫反应进行检测(受体是细胞进化过程中形成的细胞蛋白成分，可以识别周围环境中的某些微量化学物质；配体是能特异性结合受体的物质)。检测条有两条捕获带，一条是检测带(T，由配体组成)，另一条是对照带(C)。当样品与标记的受体混合时，受体将在捕获带中被捕获并呈现红色。我们可以通过反应后捕获带的颜色来判断结果。

检测方法:打开培养箱电源，当温度达到56℃时，打开阅读器，调整到相应的通道，取出待测原奶样品，摇匀；然后用移液管将300μL牛奶样品垂直滴入试纸条两侧的凹槽中，盖上培养箱的塑料盖。8分钟后，蜂鸣器鸣响，打开塑料盖，取出试纸条，用肉眼或阅读器解读结果(操作步骤见图1)。

将试纸条放入加热器槽中，将试剂条的胶带撕至红线。

摇匀样品，用移液管加入300μl牛奶样品，盖上盖子，56℃孵育8分钟(氯霉素40℃)。

将标有“C”的试纸条一端插入阅读器，按回车键进行测试。目视判读结果。

β-内酰胺类四环素试纸条:有两条检测线，BL线为β-内酰胺类检测线，TE线为四环素类检测线。如果两条检测线中的一条或两条比质控线轻，或者检测线没有出现，则结果为阳性；如果检测线的颜色等于或深于质控线，则结果为阴性。

B:B:魅惑罗莎阅读器解读结果负质控结果应为结果:负，READING小于-400。(磺胺、链霉素小于-600)，阳性质控结果应为结果:阳性，READING大于+400。

免疫分析是基于抗原-抗体复合物与抗原或半抗原和抗体特异性结合的免疫反应的生化检测技术。免疫分析主要包括放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)和酶联免疫分析(ELISA)。与常规理化分析技术相比，免疫分析技术具有操作简单、速度快、分析成本低等优点。

7结束语

综上所述，鉴于牛奶中的抗生素残留是关系到人类健康的公共卫生问题，原料奶的安全是国内乳品行业面临的共同问题，其中药物残留，尤其是抗生素残留是原料奶存在的安全问题之一。重视和加强检测已成为首要任务，并努力开发一些简单、快速、便携的筛选多残留分析技术。免疫分析法不仅是牧草生产中检测抗生素的首选方法，也广泛应用于大型乳品生产企业。