leptin CELL子刊：瘦素助力溶瘤痘苗病毒，肿瘤杀伤效果更优！

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最近，《细胞免疫学》子期刊发表了美国匹兹堡大学斯蒂芬·h·索恩(Stephen H. Thorne)研究团队的最新研究成果，创新性地利用非免疫相关基因构建了一种新的溶瘤病毒，取得了良好的治疗效果。在侵袭性黑色素瘤小鼠模型中，研究人员分别用痘苗病毒(VV)、表达瘦素蛋白(VVleptin)的痘苗病毒和PBS进行治疗。结果表明，VVleptin效果最好，实现了效应T细胞向肿瘤组织的浸润和肿瘤微环境的重建。瘦素通过改善肿瘤微环境的代谢能力，促进溶瘤病毒的治疗效果，产生免疫记忆。

文章分析

痘苗病毒可以导致免疫细胞渗透到肿瘤组织中

CL24细胞接种于C57BL/6J小鼠皮下。当肿瘤直径达到4毫米时，瘤内注射PBS和VV(2.5×106 PFU/小鼠)监测肿瘤生长。结果表明，VV实验组肿瘤生长受到一定程度的抑制，但效果并不理想。然后，分离并测序处理过的肿瘤组织的免疫细胞。与PBS对照组相比，普通痘苗病毒治疗后肿瘤组织中CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞和单核细胞的数量显著增加，而骨髓间充质干细胞和巨噬细胞的数量减少。

瘦素痘苗病毒对肿瘤有较好的治疗作用

一些研究数据表明，瘦素蛋白在体内和体外实验中都能增强T细胞的代谢功能。因此，研究人员构建了一种过表达瘦素的溶瘤痘苗病毒(VVleptin)用于后续实验，用黑色素瘤细胞(CL24)和胰腺癌细胞(Panc02)建立了肿瘤动物模型，分别用VV、VVleptin和PBS进行肿瘤治疗实验。结果表明，vvv和VVleptin均能有效抑制肿瘤生长，VVleptin效果最好，能显著延长生存期。

瘦素痘苗病毒(VVleptin)具有较好的免疫刺激作用

肿瘤治疗10天后，收获并分析被肿瘤组织浸润的免疫细胞。结果显示，过度表达瘦素的溶瘤痘苗病毒组的CD8和CD4细胞组明显高于对照组，也高于普通溶瘤痘苗病毒组(图E)。PMA和离子霉素刺激分离的淋巴细胞，检测干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α细胞因子的产生。结果还表明，溶瘤痘苗病毒组的瘦素效果明显优于其他组。

瘦素痘苗病毒(VVleptin)能产生免疫记忆

对治疗有效的小鼠进行二次肿瘤接种实验。其中，用VVleptin处理的小鼠能有效抵抗肿瘤细胞的再生长。11只实验小鼠中有8只刚刚完全停止生长肿瘤，3只小鼠可以再次生长肿瘤，但生长速度明显受到抑制。也就是说，经过VVleptin治疗后，小鼠获得了免疫记忆，可以抵抗同种肿瘤细胞的再感染。

知识发展

瘦素(Leptin，LP)是脂肪组织分泌的蛋白质激素，主要由白色脂肪组织产生。其前体由167个氨基酸残基组成，N端有21个氨基酸残基的信号肽。前体的信号肽在血液中被切断，成为146个氨基酸，分子量为16KD。一般认为它进入血液循环后会参与糖、脂肪和能量代谢的调节，促进身体减少食物摄入，增加能量释放，抑制脂肪细胞的合成，从而减轻体重。瘦素有很多功能，主要是调节脂肪和体重。

痘苗病毒属于痘病毒，痘病毒是DNA病毒。其粒径约为300×230×100纳米，呈椭圆形砖状，含有分子量为160-170 × 10 6的DNA。作为一种预防天花感染的疫苗，已经使用了200多年，并且有详细的人体安全性数据，因此成为一个非常有吸引力的溶瘤治疗平台。此外，该病毒可以包含和表达超过50kb的治疗性转基因，并具有许多已知的对抗人类和啮齿动物肿瘤的作用机制。痘苗病毒是第一种被证明在静脉注射后在肿瘤床形成一致且令人信服的感染的病毒。

然而，痘苗溶瘤病毒的广泛商业化仍面临许多挑战。与其他溶瘤病毒平台一样，患者需要在静脉注射后给予大剂量的病毒产品才能有效地输送到肿瘤，远远超过疫苗剂量。为了达到这个剂量，通常在贴壁肿瘤细胞培养中产生病毒，并使用含血清的培养基。为了满足监管关注，需要对大量病毒产品进行检测，以确保最终产品中不含致癌DNA。

制药级痘苗病毒生产中的另一个挑战是其相对较大的颗粒尺寸，因此它不能通过孔径为0.2μm或更小的灭菌过滤器。这意味着整个生产过程需要在无菌条件下进行。像许多病毒产品一样，痘苗病毒在-80℃储存时非常稳定，但需要额外的制剂研究才能获得可在-20℃、4℃甚至室温下储存的药物级产品。

目前痘苗病毒的下游纯化常采用切向流过滤策略，但死细胞释放的凋亡小体大小与痘苗病毒相似，因此需要一种独立于颗粒大小的正交纯化策略来提高纯化能力。痘苗病毒有多种异构体，其中一种被称为外被膜病毒，被认为具有避免中和抗体的能力，但目前的生产工艺不包括这种外被膜病毒异构体。因此，开发一种能够富集和稳定外包膜病毒的方法可以获得能够更有效地传递给免疫患者的产品。

参考文献:

DOI:10 . 1016/j . immunition . 2019 . 07 . 003

百度百科和维基百科，痘苗病毒，瘦素词条

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