比色皿(也称为吸收池和样品池)用于保存参考溶液和样品溶液。与光谱分析仪器配套,如分光光度计、血线蛋白分析仪、粒度分析仪等。比色皿是分光光度计的重要附件,一般为长方体,底部和两侧为磨砂玻璃,另两侧为光学玻璃制成的透明面。
比色皿有两种制造工艺,一种是粘接,另一种是高温熔化。比色皿的材料通常来自应时、熔融石英和光学玻璃。常用的比色皿有方形、矩形、圆柱形,容量为几毫升。还有微量或超微量毛细管皿,用于小样品。还有高低温恒温比色皿。色度计根据使用的波长范围分为可见光系列(称为玻璃比色杯)、紫外可见光系列(称为应时比色杯)和红外光系列(称为红外应时比色杯)。
紫外实验通常使用玻璃试管和应时试管。玻璃比色皿由光学玻璃制成,只能在可见光范围内使用,可以在330 ~ 1000 nm波长范围内使用。应时比色皿由熔融应时石英制成,可用于紫外和可见光范围以及200 ~ 400纳米的波长范围。
根据应时和玻璃比色皿在紫外区和可见光区的差异,在紫外区,玻璃比色皿强烈吸收紫外光,影响实验数据和结果,而应时比色皿不吸收紫外光,不会影响数据。因此,在紫外区用应时比色杯代替玻璃比色杯。在可见光区,玻璃的影响很小,可以忽略不计,可以作为应时比色杯。但考虑到经济因素,由于玻璃比色皿的价格远低于应时比色皿,所以可见光区通常使用玻璃比色皿,紫外区通常使用应时比色皿。
一.比色皿的识别
1、直观方法
通过观察和比较视觉和听觉不同感官方法的比色皿的外观和清晰度,我们可以区分它们。
(1)比色皿上通常有字母,玻璃比色皿边缘有“g”(玻璃玻璃),应时比色皿边缘有“q”(石英应时)或“QS/s”(石英玻璃应时玻璃)。
(2)如果没有字母logo或者logo磨损了,可以在嘴部边缘从上往下看。如果边缘是绿色的,它就是玻璃,如果它是透明的或白色的,它就是应时。更准确地说,普通玻璃的断口是浅绿色,硼酸玻璃的断口是白色,应时玻璃的断口是透明的。
(3)听声音就能听出来,应时敲的声音清脆,玻璃器皿敲的声音沉闷。
(4)应时的硬度大于玻璃。如果两个比色皿研磨,应时比色皿磨损轻微,而玻璃比色皿磨损相对较大。
(5)白炽灯可用于照射。透光率高的玻璃试管和应时试管应稍显浑浊。
【注意】:以上都是快速简单的鉴别方法。除非你是光学专业人士,否则很容易因为个人差异而出错。一般只能作为权宜之计。而且现在的制备工艺很精致,玻璃比色皿和应时比色皿外观都很清晰透明,厚度和质量差别不大,不宜只使用这些感官视觉识别方法。
2.机器测试方法
使用紫外-可见分光光度计识别玻璃、应时比色皿和配对比色皿。
现行国家检定规程规定,应时比色皿在250nm处的吸光度应小于0.07abs,大于0.07abs则为玻璃比色皿。
比色皿中没有放置样品,使用空气体作为介质。波长设为250nm,调至零。将试管放入样品通道。如果吸收值小于0.07abs,则是应时的,否则是玻璃的。
第二,比色皿的使用
使用比色杯时,两个透明面应完全平行,并垂直放置在比色杯框架内,以保证测量时入射光垂直于透明面,避免光的反射损失,保证光路固定。
比色皿一般为底部和两侧均有磨砂玻璃的长方体,另两侧由光学玻璃制成的透明面由玻璃粉高温熔融烧结胶合而成。所以使用时要注意以下几点。
(1)取比色杯时,只能用手指触摸两侧磨砂玻璃,避免接触光学表面。同时,小心处理以防损坏。
(2)含有腐蚀性玻璃物质的溶液不应长时间保存在比色皿中。
(3)比色皿高温后易爆裂,不宜在火焰或电炉上加热或在干燥箱中烘烤。
(4)当比色皿内部被污染时,用无水乙醇清洗,并及时擦干或擦拭干净。
(5)比色皿的透明表面不应接触硬物或污垢。
(6)盛装溶液时,高度应为比色皿的2 /3。如果光学表面有残留液体,可以用滤纸轻轻吸收,然后用镜头纸或丝绸擦拭。
(7)试管中的液体应沿着粗糙的表面倾斜,并慢慢倾倒。不要倒置试管。直接放在干净的滤纸上吸收残留液体,然后用蒸馏水冲洗比色皿内部并倾倒(操作同上),避免液体流出,这样第二次测量时就不需要擦拭比色皿,避免擦拭带来的误差。
(8)比色前,将蒸馏水放入每个比色皿中,在比色波长下进行比较。选择4-8个吸光度误差在0.001以内的比色皿进行比色测定,可以避免比色皿差异造成的测量误差
(9)使用完色盘后,立即用水冲洗。如有必要,浸泡在1:1盐酸中,然后用水冲洗干净。
前人使用的经验:
1使用前,将试管浸泡在2%硝酸溶液中24小时,然后依次用水和蒸馏水冲洗,并干燥。
2比色前,将蒸馏水放入每个比色皿中,在比色波长下进行比较。选择4-8个吸光度误差在0.001以内的比色皿进行比色测定,可以避免比色皿差异造成的测量误差
3.试管中的液体应沿着粗糙的表面倾斜,并慢慢倾倒。不要倒置试管。直接放在干净的滤纸上,排出剩余的液体。然后用蒸馏水冲洗比色皿内部并倾倒(操作同上),避免液体流出,这样第二次测量时就不需要擦拭比色皿,避免了擦拭带来的误差。
第三,比色皿的管理和维护
(1)根据实验中使用的波长选择相应的比色皿(玻璃或应时)。应时比色皿用于紫外区,而玻璃比色皿和应时比色皿可用于可见光区。考虑到价格问题,可见光区使用玻璃比色皿。尽量由专门的人或专门的团体来奉献,清理干净后再归还。这样就很难混淆不同的比色皿,也不影响比色皿之间的匹配。
(2)尽量保证每个实验中的每一个紫外分光光度计都有专门的配套比色皿,不互相混用。如果交叉使用,可以记录下来,下次恢复正常。
(3)使用后清洁,清洁后在通风阴凉处干燥,彻底干燥后放入相应配件中。放置时,配件应保持清洁干燥,比色皿应坚持“光滑面朝上,两面粗糙”的原则,以便抓住两个粗糙面取出使用,不易弄脏光滑面。
四、比色皿的使用注意事项
1.取比色杯时,只能用手指触摸两侧磨砂玻璃,避免触摸光学表面,不要用力过猛。
2.切勿让硬物或灰尘接触光学表面。当含有溶液时,高度应为比色皿的2/3。如果光学表面有残留液体,可以用滤纸轻轻吸收,然后用镜头纸或丝绸沿同一方向擦拭。
3.任何含有腐蚀玻璃物质的溶液都不能长时间存放在试管中。
4.使用试管后,立即用水冲洗干净。如有必要,浸泡在1: 1盐酸中,然后用水冲洗干净。
5.试管不能在火焰或电炉上加热,也不能在干燥箱中烘烤;
6.如果您在测量过程中对比色杯有任何疑问,可以自行检测。波长可以在实际使用的波长下选择,一套比色皿中装有蒸馏水,将一个比色皿的透光率调整到95%(数显仪设为100%),测量其他比色皿的透光率。如果透光率差不超过0.5%,可以一起使用。
7.更换比色杯后,误差可达4%-7%。因此,在精确测量时;一定要看比色皿的箭头标记。如果没有标记,可以用来匹配验证,然后按方向用同一个箭头在磨砂玻璃上端做标记。以免反向操作。
8.使用比色杯时不要碰撞。
动词 (verb的缩写)试管的清洁
比色皿必须保持清洁,没有疤痕。玻璃和应时比色皿通常可以用冷酸或有机溶剂如乙醇、乙醚、丙酮和正己烷清洗。
比色皿清洗液:浓盐酸:甲醇:水= 1: 4: 3
如果试管被有机物污染,应使用盐酸-乙醇(1: 2)混合物或相应的有机溶剂如醇醚混合物进行清洗。比如油污可以用石油醚洗,铬天青显影剂污染可以用硝酸(1: 2)洗。试管不能用碱液清洗,也不能用硬布或刷子擦洗。
铬酸洗液效果不错,但浸泡时间不宜过长,否则会腐蚀比色皿的粘合剂,使其分崩离析。此外,由于它会吸附在比色杯壁上,会出现一层铬化合物薄膜,很难去除。铬酸清洗过的比色皿在紫外线范围内基本不透明,无法使用。
稀酸浸泡效果好,但酸浓度不宜过高。
也可将其浸泡在阴离子表面活性剂的冷或温(40~50℃)碳酸钠溶液(2%)中,加热10分钟左右。有色物质的污染可用盐酸(3摩尔/升)-乙醇(1+1)溶液洗涤。
被有色物质污染的比色皿在盐酸:乙醇(1:2)中浸泡一段时间后,颜色会被去除。
比色皿是否干净是影响分光光度法测定准确度的因素之一。所以一定要注意选择正确的清洗方法。
参考经验是:如果确定溶液是酸的,如果不干净,用弱碱溶液洗;如果不干净,用弱酸溶液清洗;如果是有机物,如果不干净,用有机溶剂如酒精清洗。
应根据确定的各种试剂,通过溶解和中和进行清洗。原则上不要损坏比色皿的结构和透光性能;其次,可以采用中和溶解的方法,达到保持比色杯清洁如初的效果。分光光度计的比色皿是否干净是影响测定准确度的因素之一。
按照以下步骤清洁比色皿:
1.使用完比色皿后,用合适的溶剂清洗,注意内外清洗。如果溶剂无毒,可以用手指握住比色皿的两端用力摇晃,次数应不少于三次。
2.然后用大量自来水冲洗,这对水溶液和盐溶液很重要。当然,如果使用的溶剂不是亲水性的,这一步可以放弃。
3.最后用去离子水清洗,内外兼顾。如果溶剂不亲水,这一步也可以放弃。
4.洗涤后不要故意烘干比色杯,放入比色杯盒中,不要盖上盖子,让其自然干燥。
注意:
使用后最好立即清洗,否则样品干燥后更难处理;
清洗后的比色皿应透明且无水迹;
常用的比色皿可以用纯水或分析纯乙醇清洗浸泡保存。
当测定溶液为无机盐溶液时,应时比色杯的一般清洗方法如下。
(1)用乙醚和无水乙醇(各50%)的混合物清洗。
(2)如果太脏,可以用专用洗剂清洗。但时间要短(10分钟以内),然后用清水清洗。注意选择比色杯清洗液的原则,去污效果好,不损伤比色杯,不影响测定。
(3)不要使用洗涤剂等洗涤剂。以免影响测量。
(4)试管不能用碱液清洗,也不能用硬布或刷子擦洗。
各种酸、碱、有机溶液的情况下,如果溶液是酸的,可以用弱碱溶液洗涤;如果是碱,可以用弱酸溶液洗涤;如果是有机物,可用有机溶剂如无水乙醇洗涤。
值得注意的是,分析实验中常用的铬酸洗液(洗涤液)不适合清洗比色杯,因为带水的比色杯可能会在洗涤液中产生热量,导致比色杯结合面开裂损坏。同时,微量铬可能残留在被洗涤液洗涤过的比色皿中(铬在紫外区被吸收),影响实验测定。一般提倡用硝酸和过氧化氢的混合溶液(5 :1)浸泡洗涤,然后用清水冲洗干净。
最后,对于普通方法难以清洗的比色皿,可以采用以下两种方法。
(1)将试管浸泡在含有少量阴离子表面活性剂的碳酸钠(20g/l)溶液中,用水冲洗,再浸泡在过氧化氢和硝酸(5 :1)的混合溶液中半小时。
(2)用盐酸、水和甲醇(1 :3 :4)的混合溶液浸泡在通风柜中,一般不超过10分钟。
不及物动词色度匹配和色度误差测量说明
对比色皿比较麻烦,通常是用分光光度法测定比色皿误差后再测定样品。
1.试管配对
首先配制浓度为0.6 ~ 0.8的样品溶液进行测量,然后用同一批溶剂将溶液稀释一倍,然后测量吸光度。
从测试溶液的制备开始,并行操作两次,并指示测定时的温度。
用同一仪器测量的两个结果之间的偏差不得超过1%。当结果符合要求时,对各仪器测得的平均值进行统计。如果相对标准偏差不超过1.5%,则测得的平均值即为相应药物的吸收系数。
现行国家检定规程规定两对比色皿的差值不得超过0.5%。因为玻璃比色皿和应时比色皿都可以在可见光区使用,所以可以直接比较每对比色皿之间的透光率。
使用四对比色皿,波长为500纳米,以空气体和纯水为介质,测量每组中一个比色皿的透光率至100%,并测量另一个比色皿的透光率。如果透光率差不超过5% (△T = 0.005 =0.5%),则可以成对使用。
2、比色皿误差测定和样品测定
2.1.随意拿2个干净的比色皿。
2.2.将相同的空白色溶液添加到2个试管中。
2.3.取其中任意一个比色皿作为空白色比色皿,将仪器的吸光度调至0;
2.4.测量另一个试管的吸光度,测量值为A0。用这个比色皿测量样品。如果仪器的显示值为A,则样品的实际测量值为A。
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