使用显微镜的7个步骤 光学显微镜使用方法（干货）

一、普通光学显微镜的主要结构

普通光学显微镜的结构主要分为三个部分:机械部分、照明部分和光学部分。显微镜各部分的结构如下:

1.机械构件

(1)镜座:是支撑整个镜体的显微镜底座。

(2)镜柱:是镜座上的直立部分，用于连接镜座和镜臂。

(3)镜臂:一端连接在镜柱上，另一端连接在镜筒上，镜筒是取放显微镜时的手握部分。

(4)镜筒:连接在镜臂的前上方，上端安装目镜，下端安装物镜转换器。

(5)物镜转换器(旋转器):连接到棱镜壳的下部，可以自由旋转。圆盘上有3-4个圆孔，是安装物镜的地方。旋转转换器时，可以更换不同倍数的物镜。当你听到敲门声时，你可以观察。此时物镜光轴正好对准光孔中心，光路接通。

(6)载物台(载物台):在镜筒下面，有方形和圆形，用于放置载玻片标本，中间有一个透光孔。我们使用的显微镜在载物台上有一个载玻片标本推动器(推动器)，推动器左侧有一个弹簧夹，用于固定载玻片标本，在镜筒下方有一个推动器调节轮，用于左右、前后移动载玻片标本。

(7)调节器:是安装在镜头立柱上的大螺旋和小螺旋，使镜头台在调节过程中上下移动。

①粗调器(粗螺旋):大螺旋被称为粗调器，它能使载物台在移动时快速、大幅度地升降，因此能快速调节物镜与标本之间的距离，使物像出现在视野中。通常，在使用低功率镜子时，使用粗调器来快速找到物体图像。

②微调器(细螺旋):小螺旋对微调器进行刻度，可以使镜台在移动时缓慢升降，在使用大功率镜子时经常使用，以获得更清晰的物体，观察标本不同层次和深度的结构。

2.照明部分

它安装在镜台下面，包括一个反射镜和一个集光器。

(1)反光镜:安装在镜座上，可以任意方向旋转。它有平面和凹面，它的作用是将光源发出的光反射到聚光器上，然后通过光孔照射标本。凹面镜聚光效果强，适合光线弱的时候使用，平面镜聚光效果弱，适合光线强的时候使用。

(2)集光器(聚光器)位于载物台下方的集光器架上，集光器架由聚光透镜和光圈组成，其作用是将光线集中在待观察的标本上。

①聚光器:由一个或几个透镜组成，起到聚光的作用，加强对标本的照明，使光线进入物镜。镜头柱旁边有一个调节螺丝，可以通过旋转来升降聚光器，从而调节视野内的亮度。

②光圈(虹彩光圈):在聚光器下面，由十几块金属片组成，从外面伸出一个手柄，可以推动手柄调节其开口的大小来调节光量。

3.光学部分

(1)目镜:安装在镜筒上端，通常2-3个目镜上刻有5×、10×或15×符号以表示放大倍数，一般安装10×目镜。

(2)物镜:装在镜筒下端的旋转体上，一般有3-4个物镜，其中刻有“10×”符号的最短的是低倍率镜，刻有“40×”符号的较长的是高倍率镜，刻有“100×”符号的最长的是油镜。此外，在大功率镜和油镜上往往还会加一圈不同颜色的

物镜上还有光圈比(N.A .)的标记，反映了镜头的分辨率。数字越大，分辨率越高。每个物镜的孔径比如下:

物镜的孔径比(n.a .)和工作距离(mm)

10× 0.25 5.40

40× 0.65 0.39

100× 1.30 0.11

表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物像调整清晰)时，物镜下表面与盖玻片上表面的距离(盖玻片厚度一般为0.17mm)。物镜放大倍数越大，其工作距离越小。

显微镜的放大率是物镜和目镜放大率的乘积。比如物镜为10×目镜为10×放大倍数为10×10=100。

4.在使用成像系统的过程中，为了便于观察，通常将成像系统安装在光学显微镜的目镜上，通过成像系统将显微镜视场内的图像传输到电子显示屏上，以便更好的观察显微镜视场内的标本。如下图所示:

二、水浸片的生产

在水产疾病的诊断过程中，最常用的方法是将病变组织制成水浸切片，放在台上观察。具体生产步骤如下:

取一个干净的载玻片，滴一滴清水在上面(如果水浸片是直接与水接触的组织或器官制成的，淡水用于淡水品种，海水用于海水品种，生理盐水用于不与水接触的组织和器官制成的水浸片)。首先，从要检查的部位取一小块组织。至于载玻片上的水滴，用镊子轻轻搅拌分散，然后拿一个干净的盖玻片与载玻片的一侧接触。如果水太多，用纱布或吸水纸吸收盖玻片周围多余的水。以这种方式，制成了水浸板。

在制作水浸片的过程中，要注意以下几点:

1.不应采集过多的待检组织样本，过多容易导致透光率差，影响显微镜观察。

2.必须先滴水，然后释放组织，否则会产生气泡，影响观察。

3.水生动物不与水接触的组织器官要用生理盐水处理，否则病原体会因渗透压不同而破碎、缩小或死亡，影响诊断。

4.水浸片应在现场制作，不应储存。

第三，使用普通光学显微镜的步骤。

1.实验时，显微镜应放在座位前桌面略偏左的位置，镜座离桌边约6 ~ 7厘米。

2.打开光源开关，将光强调节到合适的大小。

3.转动物镜转换器，使低倍率透镜面向台上的通光孔。先将镜头调整到离舞台1 ~ 2 cm左右，然后用左眼看目镜，再调整聚光器的高度，最大限度地调整孔径光阑，使光线通过聚光器进入镜筒，视野开阔。

4.将待观察的载玻片放在台上，使载玻片的被观察部分位于光孔的中心，然后用标本夹夹住载玻片。

5.用低倍镜观察(物镜10X，目镜10X)。观察前，转动粗调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐靠近载玻片。需要注意的是，物镜不能接触载玻片，以防透镜压坏载玻片。然后，左眼在目镜里，右眼闭着(养成睁眼用显微镜观察的习惯，这样观察的时候可以用右眼看图纸)，转动粗对焦手轮，让载物台慢慢下降，很快就可以看到玻璃里物质的放大图像。

6.如果视野中看到的物体图像不符合实验要求(物体图像偏离视野)，可以慢慢调整舞台的移动手柄。调整时需要注意的是，幻灯片的移动方向正好与视野中看到的物体图像的移动方向相反。如果物体图像不清晰，可以调整微聚焦手轮，直到物体图像清晰。

7.如果使用高倍率物镜进行观察，则在切换高倍率物镜之前，应将需要放大观察的部分物像移至视野中心(当低倍率物镜切换到高倍率物镜进行观察时，物像在视野中的范围大大缩小)。一般功能正常的显微镜，基本上都是用低倍率物镜和高倍率物镜对焦。用低倍物镜观察清楚时，用高倍物镜可以看到物像，但物像不一定清晰，可以通过转动微动调焦手轮来调节。

8.大功率物镜转换后，看清物像后，可根据需要调整光圈大小或聚光器高度，使光线符合要求(一般用大功率物镜代替小功率物镜观察时，视场略暗，需调整光强)。

9.观察后，先将物镜从光孔中取出，然后将光圈调整到最大，然后慢慢降低载物台，检查零件是否损坏。应特别注意检查物镜是否沾有水和油。如果沾了水或油，要用镜头纸擦拭，检查后可以铺上防尘布。

四、使用不同放大倍数的显微镜镜头

1.低功率反射镜的使用

(1)取放显微镜:显微镜通常存放在柜子或盒子中，使用时从柜子中取出。右手握住镜臂，左手握住镜座，将显微镜放在左肩前方的实验台上。镜座后端距离桌子1-2英寸，方便坐和操作。

(2)对光:用拇指和中指移动旋转器(不要握着物镜移动)，使低倍镜对准载物台的通光孔(旋转时听到敲击声，表示物镜光轴对准镜筒中心)。打开光圈，抬起集光器，将反射镜转向光源，用左眼在目镜上观察(打开右眼)，同时调整反射镜的方向，直到视野中的光线均匀明亮。

(3)载玻片标本的放置:取一个载玻片标本放在镜台上，确保带盖玻片的一面朝上，切勿倒置。用推动器的弹簧夹住，然后转动推动器的螺钉，将待观察的部分调整到光孔的中心。

(4)调整焦距:用左手逆时针转动粗调仪，使载物台从物镜到标本慢慢上升到5 mm左右。升起舞台时，注意不要在目镜上观察。一定要看着镜台从右侧上升，以免上升太多，对镜片或标本切片造成损伤。然后双眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，左手慢慢顺时针转动粗调仪，使载物台慢慢下降，直到视野中出现清晰的物体。

如果对象图像不在视野的中心，调整滑块推进器将其调整到中心(注意滑块的移动方向与对象图像在视野中的移动方向相反)。如果视野中的亮度不合适，可以通过提升集光器的位置或打开和关闭光圈来调节。如果调整焦距时载物台下降超过工作距离(>:5.40mm)而没有看到图像，说明操作失败，应重新操作，切不可心急盲目上镜台。

2.大功率反射镜的使用

(1)选择目标:首先将待进一步观察的部分调整到低功率镜下的中心，同时将物体图像调整到最清晰的程度，以便在高功率镜下观察。

(2)转动转换器，更换大功率镜头。转换高倍率镜头时，转速要慢，从侧面观察(防止高倍率镜头与载玻片碰撞)。如果高倍率镜头与载玻片发生碰撞，说明低倍率镜头焦距没有调整，应该重新操作。

(3)调节焦距:切换大功率镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般可以看到不清晰的物像，可以逆时针方向移动微调器的螺旋0.5-1圈左右，得到清晰的物像(不要用粗调器！)

如果视野亮度不合适，可以通过集光器和光圈来调节。如果需要更换载片样本，必须顺时针旋转粗调器(切勿转错方向)以降低载物台，然后才能取出载片样本。

3.油镜怎么用

(1)使用油镜前，必须用低、高倍镜观察，然后将需要进一步放大的部分移到视野中心。

(2)将集光器升至最高位置，并将光圈打开至最大。

(3)转动转换器，使大功率镜头离开通光孔，在被观察部位的载玻片上滴一滴芳香沥青，然后慢慢转动油镜。更换油镜时，从侧面水平看镜片与载玻片之间的距离，这样镜片就可以浸入油中而不会压碎载玻片。

(4)用左眼观察目镜，慢慢转动微调器，直到物体图像清晰。

如果没有物体图像或目标被忽略而想再次搜索，在加油区外搜索时应遵循低倍率→高倍率→油镜的程序。加油区重新搜索应遵循低倍率→油镜的程序，不得通过高倍镜，以免油污染镜头。

(5)使用油镜后，用镜纸上的少量二甲苯擦去镜片和标本上的芳香沥青，然后用干燥的镜纸清洗干净。

五、显微镜的使用注意事项

(一)、正确安装的问题

使用显微镜前，应先安装显微镜的目镜和物镜。目镜的安装比较简单，主要问题在于物镜的安装。因为物镜的镜头比较贵，安装时如果螺纹没有关好，很容易掉在地上，造成镜头损坏。因此，为了安全起见，强调操作者在安装物镜时，要用左手食指和中指握住物镜，然后用右手安装物镜，这样即使安装不当，也不会掉在地上。

(2)、正确光线的问题

使用显微镜时，瞄准光线是重要的一步。一些操作者随意转动物镜以面对通光孔，而不是根据需要用低功率镜瞄准光。我转动镜子喜欢用一只手，经常把镜子拉下来。需要叫一面低功率的镜子对准光线。光线强的时候用小光圈和平面镜，光线弱的时候用大光圈和凹面镜，双手旋转镜子，直到看到均匀明亮的圆形视野。光线对准后，不要随意移动显微镜，以免光线无法通过反射镜准确进入光孔。

(3)、正确使用准聚焦螺旋

利用准焦距螺旋调整焦距，找到物体图像，可以说是显微镜使用中最重要的一步，也是操作者最困难的一步。操作人员在操作过程中容易出现以下错误:一是大功率镜下直接对焦；第二，无论镜筒上升还是下降，眼睛始终是看着目镜的；第三，我们不知道物距的临界值，物距调整到2~3 cm还在往上走，准焦螺丝旋转的速度很快。前两个误差往往会导致物镜与加载物碰撞，损坏加载物或透镜，而第三个误差是操作者使用显微镜时最常见的现象。鉴于上述误差，操作人员应注意焦距必须在低功率镜中向下调整。首先转动粗调焦螺丝，使镜筒慢慢下降，物镜靠近载玻片。但是，注意不要让物镜碰到载玻片。在这个过程中，眼睛应该从侧面看物镜，然后用左眼看目镜，慢慢反向调整粗对焦螺丝，使镜筒慢慢上升，直到看到物体图像。显微镜的物距一般在1 cm左右，所以如果物距远超过1 cm，但仍看不到物像，可能是标本不在视野内，或者粗准焦螺旋旋转速度过快。此时，应调整装载位置，然后重复上述步骤。当模糊的物体图像出现在视野中时，需要切换到精细的准聚焦螺旋调整。这样才能缩小搜索范围，提高寻找物体图像的速度。

(4)物镜转换问题

在使用低倍率镜和切换到高倍率镜时，操作者往往喜欢用手指直接推动和旋转物镜，被认为是省力的，但容易使物镜光轴偏离，因为转换器的材料柔软，精度高，螺纹受力不均，容易松动。一旦线断了，整个转换器就报废了。操作者应手持转换器的下旋转板来转换物镜。

(5)正确使用眼睛的问题

用显微镜观察物体时，双眼应同时睁开，左眼应望向目镜。但是，很多运营商往往做不到这一点。他们喜欢用手遮住右眼或者干脆闭上右眼，不符合实验的观察要求。这种不良习惯会造成左眼疲劳，同时他们也不能边观察边画画。需要注意的是，左眼要尽量靠近目镜，右眼尽量往视野里看。如果反复训练，就会达到同时睁眼观察的要求。或者你可以做以下练习:睁开眼睛，用一张纸或手掌放在鼻子前站在两眼之间，让左右眼不能看对方的对面，然后有意识地先看左边，再看右边，每天早晚各做3~5次，不到一周就能学会。

(6)视野中的污点判断问题

转动目镜，污渍在目镜上移动。如果你不动，你就不在目镜上

移动载玻片，污渍在载玻片上移动。如果它不动，就不在滑梯上

如果视野中的污渍不在载玻片和目镜上，那就是在物镜上。

(七)显微镜视野内载玻片和物体的运动

因为是反转图像，所以幻灯片的移动方向与物体图像的移动方向相反。

(八)使用过程中需要注意的其他问题

1.拿镜子时必须是右手握臂，左手握托架的姿势，不能单手抽出，以免零件脱落或与其他地方碰撞。

2.小心处理。请勿将显微镜放在测试台的边缘，以免磕碰掉在地上。

3.保持显微镜清洁。光学和照明部分只能用镜面纸擦拭。不要用布用嘴或手擦拭，用布擦拭机械部件。

4.水滴、酒精或其他药物不应接触镜头和镜台，如果被污染，应立即擦拭干净。

5.放置载玻片标本时，对准光孔中心，不要将载玻片向后放，以免载玻片被压碎或物镜损坏。

6.养成双眼同时睁开，左眼观察视野，右眼画画的习惯。

7.不要随意取下目镜，以免灰尘落入物镜，也不要随意拆卸各种零件，以免损坏。

8.使用后必须恢复后才能放回镜盒。步骤如下:取下试件，转动旋转器使镜片离开光孔，放下镜台，将镜子平放，放下集光器(但不要接触镜子)，关闭光圈，退回推片器，盖上丝布和外罩，放回试验台柜。最后填写登记表。(注意:反射镜通常应该垂直放置，但有时因为集光器没有升高到合适的高度，镜台下降会损坏光圈，所以这里改为水平放置。

转自；水产技术百科全书