01
为什么DH5α生长缓慢/有小斑点?
原因:
Rosetta(DE3)有一个具有氯霉素抗性的质粒,可以补充6个稀有密码子(精氨酸Arg R: AGA AGG,异亮氨酸Ile I: AUA,脯氨酸Pro P CCC,亮氨酸Leu L:CUA,甘氨酸Gly G:GGA)的tRNA。
14
当BL21(DE3)细胞用于蛋白质表达时,细胞一被诱导就死亡。我可以用什么方法解决这个问题?
可以使用表达BL21(DE3)pLysS或T7pLysY的菌株。
15
pLysY和pLysS有什么区别?
pLysY表达的T7溶菌酶保留了对T7RNA聚合酶的抑制作用,但失去了细胞壁水解的酰胺酶活性,从而避免了诱导过程中的细胞裂解。
pLysS表达的T7溶菌酶具有完全的活性。
16
含二硫键的蛋白质用什么样的感受态细胞比较好?
OrigamiB(DE3)或Shuffle T7-K12和Shuffle T7-B..
17
用什么样的感受态细胞来增加表达蛋白的可溶性表达?
OrigamiB(DE3)或Shuffle T7-K12和Shuffle T7-B..
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使用OrigamiB(DE3)感受态细胞需要注意什么?
OrigamiB(DE3)感受态细胞对卡那霉素和四环素有抗性,因此转化的质粒不能对卡那霉素或四环素有抗性。
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说明书上说这个XL10-Gold细胞有四环素和氯霉素抗性,我的质粒是氨苄青霉素抗性。转化这个质粒需要加四环素和氯霉素抗生素吗?
不会,四环素和氯霉素在菌株基因组中稳定存在,不需要添加这两种抗生素。
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下面的抗生素怎么配制,工作浓度是多少?
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